FAS/FASLG基因多态性及其mRNA水平与系统性红斑狼疮的相关性研究
本文关键词：重症急性胰腺炎SIRS时pMΦ吞噬凋亡PMN功能异常的分子机制及中西医结合治疗，由笔耕文化传播整理发布。
《安徽医科大学》 2012年
FAS/FASLG基因多态性及其mRNA水平与系统性红斑狼疮的相关性研究
卢曼曼
【摘要】：研究背景系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus, SLE）是一种典型的自身免疫性疾病，患者体内存在自身反应T、B淋巴细胞的过度活化，细胞因子网络失衡和细胞凋亡紊乱等多种免疫异常，从而导致大量致病性的自身抗体和免疫复合物的产生，引起多系统和多器官损害。SLE患者病死率高，生存质量差。SLE的病因至今尚未阐明，一般认为在遗传因素和环境因素等多种因素的共同作用下导致机体免疫功能的异常。SLE的免疫异常与细胞凋亡紊乱密切相关，国内外研究显示细胞凋亡紊乱及凋亡清除障碍在SLE发病中起重要作用。 细胞凋亡，又称程序化细胞死亡（programmed celldeath，PCD），1972年由英国的Kerr首先提出，是一种多基因控制的细胞自主性死亡的方式。细胞凋亡与调控机体发育，维护内环境稳定以及肿瘤的发生，病毒感染和免疫密切相关。在SLE患者体内，由于外周免疫耐受被打破，因而凋亡细胞作为最先的免疫原刺激机体自身的免疫系统，造成自身反应性淋巴细胞的异常活化和增生。许多信号途径参与了细胞凋亡的调节，其中死亡受体途径中的Fas和FasL（Fas ligand）信号途径有着重要地位。 人FAS（Fas）基因定位于10号染色体q24.1区，有8个内含子和9个外显子，基因长度约25kb，其编码的Fas分子是一个相对分子质量为45kd的I型跨膜蛋白，又称Apo-1或CD95，属于肿瘤坏死因子受体/神经生长因子受体超家族（TNFR/NGFR）；Fas广泛表达于各类细胞表面，尤其是活化的T、B淋巴细胞、胸腺细胞及自然杀伤细胞。人FASLG（FasL）基因定位于1号染色体q23区，有3个内含子和4个外显子，其编码的FasL分子是一种相对分子质量约40kd的三聚体II型跨膜糖蛋白，又称CD95L，是Fas的天然配体，属于肿瘤坏死因子（TNF）家族的细胞因子；FasL主要表达于活化的效应淋巴细胞表面。Fas/FasL的主要功能是诱导细胞凋亡，在维持机体自身稳定和保持内环境的平衡方面起重要作用。在狼疮鼠模型的研究显示，当Fas或FasL基因结构发生改变或表达缺陷时，由Fas/FasL介导的自身反应性淋巴细胞凋亡受限，产生大量的自身抗体，免疫耐受被打破，从而诱发自身免疫性疾病。 近年来在SLE患者中的研究表明，Fas/FasL介导的细胞凋亡机制异常与SLE有密切关系。本课题组前期的研究发现SLE外周血单个核细胞凋亡速度增加，且Fas的蛋白表达水平升高，提示Fas可能在SLE发病机制中发挥重要作用。SLE是一种复杂的多基因遗传疾病，遗传因素在SLE发病中起着至关重要的作用，在不同种族人群中的研究已证实许多基因与SLE易感性有关。 在中国汉族人群FAS和FASLG基因多态性及其mRNA表达与SLE关联目前研究较少，因此，本研究通过收集SLE患者及正常对照的血液标本，采用病例对照研究，并结合Meta分析，探讨FAS和FASLG基因多态性与SLE的疾病易感性之间的关联；同时，检测了FAS和FASLG基因mRNA表达水平，并结合临床特征，分析FAS和FASLG基因mRNA表达水平与SLE疾病活动度及不同临床和实验室特征之间的关系，并分析了基因多态性与mRNA表达水平的关系，研究分为2个部分。 第一部分FAS和FASLG基因多态性与系统性红斑狼疮的相关性研究 目的比较SLE患者和正常对照FAS基因（rs2234767和rs1800682）以及FASLG基因（rs763110）的基因型频率和等位基因频率，并分析单倍型，探讨其与中国汉族人群SLE易感性的关系，同时结合临床资料分析其与SLE主要临床特征之间的关系。Meta分析研究不同人群3个SNP位点的多态性与SLE疾病易感性之间的关联。 方法病例共552例，来自两所三甲医院的SLE住院和门诊病例，病例均符合美国风湿病学会1997年修订的SLE分类标准；健康对照718例，来自健康体检中心和健康献血员均排除SLE和其它自身免疫疾病。收集研究对象的一般情况和病例的相关临床资料，采集所有研究对象的外周静脉血，提取DNA冻存。利用ABI7300PCR仪，采用TaqMan探针基因分型技术，检测FAS和FASLG基因3个位点的多态性；比较SLE病例组和对照组中各多态位点的基因型和等位基因频率分布是否存在差异，用SPSS10.01软件进行统计分析，并应用SHEsis软件构建单倍型。采用Meta分析方法检索文献，提取数据，应用Stata10.0对各研究结果进行异质性检验和效应值合并以及发表偏倚评估。以=0.05作为检验水准。 结果 （1）哈德-温伯格平衡（Hardy-Weinverg equilibriun，HWE）检验：3个位点rs2234767、rs1800682和rs763110的基因型分布在对照组均达到遗传平衡。（rs2234767对照组：2=1.235，P=0.266，，病例组：2=4.451，P=0.035；rs1800682对照组：2=3.280，P=0.070，病例组：2=5.134，P=0.023；rs763110对照组：2=1.666，P=0.197，病例组：2=1.074，P=0.300）。 （2）FAS基因分型：位点rs2234767三种基因型G/G、A/G、A/A的频率在病例组和对照组中分别为46.6%、40.4%、13.0%和40.3%、44.8%、14.9%，基因型A/G与G/G两组比较差异有统计学意义（P=0.041）；G和A等位基因的频率在两组中分别为66.8%、33.2%和62.7%、37.3%，两组间比较差异有统计学意义（P=0.033）；位点rs1800682三种基因型A/A、A/G、G/G的频率在病例组和对照组中分别为39.7%、42.9%、17.4%和35.4%、45.4%、19.2%，A和G等位基因的频率在两组中分别为61.1%、38.9%和58.1%、41.9%，基因型频率及等位基因频率在病例组和对照组之间差异均无统计学意义（P0.05）。 （3）FASLG基因分型：位点rs763110三种基因型C/C、C/T、T/T的频率在病例组和对照组中分别为59.2%、34.4%、6.3%和58.9%、34.5%、6.5%，C和T等位基因的频率在两组中分别为76.4%、23.6%和76.2%、23.8%，基因型频率及等位基因频率在病例组和对照组间差异均无统计学意义（P0.05）。 （4）FAS基因单倍型分析：连锁分析显示，位点rs2234767与rs1800682存在连锁不平衡（D'=0.937，r2=0.708），并通过软件构建两位点的单倍型，结果发现在中国汉族人群中主要有3种常见单倍型：AG、GA和GG，单倍型GA可能增加了SLE发病的风险（P=0.039）。 （5）基因分型与主要临床特征的关系：分析rs2234767、rs1800682和rs763110多态性与SLE主要临床特征潜在的易感性关联，结果显示在552例SLE患者中以上各位点的基因型与面部红斑、光敏感、口腔溃疡、狼疮肾炎、关节炎和神经损害均无统计学关联（P0.05）。 （6）Meta分析结果：包括本次实验研究在内，总共8个研究纳入了Meta分析， 结果发现3个位点rs2234767、rs1800682和rs763110等位基因的分布在SLE病例组和对照组间差异均有统计学意义（P0.05）。 结论研究结果显示，FAS基因rs2234767位点多态性可能与中国汉族人群SLE遗传易感性有关，rs2234767和rs1800682构建的单倍型GA可能增加SLE的发病风险；Meta分析研究发现FAS基因rs2234767和rs1800682及FASLG基因rs763110SNPs位点多态性可能与不同人群的SLE疾病遗传易感性有关联。 第二部分FAS和FASLG基因mRNA水平与系统性红斑狼疮的相关性研究 目的比较SLE患者组和正常对照组、SLE肾炎组和非肾炎组以及活动期SLE患者组和非活动期SLE患者组，FAS和FASLG基因mRNA表达水平的差异，分析其与SLE临床与实验室特征以及疾病活动度的关联，并探讨FAS和FASLG基因多态性与mRNA水平之间的关系。 方法随机选取研究一的SLE病例35例和正常对照34例。参照SLE疾病活动指数、美国风湿病学会1997年修订的SLE分类标准，收集病例的临床和实验室资料。采集研究对象外周血，提取RNA，采用实时荧光定量聚合酶链反应（real timequantitative polymerase chain reaction，RTQ-PCR）技术检测PBMC中FAS和FASLG基因mRNA表达水平，利用Mann-Whitney秩和检验比较在SLE病例组和对照组间是否存在差异。Spearman相关分析FAS和FASLG基因mRNA表达水平与SLEDAI评分的关系。采用SPSS10.01软件进行统计分析，P0.05认为差异有统计学意义。 结果 （1）FAS mRNA表达水平：RTQ-PCR结果显示SLE患者PBMC中FAS mRNA表达水平高于正常对照水平（P=0.011），活动期SLE患者组高于非活动期患者组（P=0.045），然而狼疮肾炎组与非狼疮肾炎组差异无统计学意义（P0.05）。 （2）FASLG mRNA表达水平：RTQ-PCR结果显示SLE患者PBMC中FASLGmRNA表达水平与正常对照水平相比差异无统计学意义（P0.05），狼疮肾炎组高于非狼疮肾炎组（P=0.015），然而活动期SLE患者组与非活动期患者组差异无统计学意义（P0.05）。 （3）FAS和FASLG mRNA表达水平与SLE主要临床特征的关系：分析结果显示SLE患者FAS mRNA表达与面部红斑（P=0.041）和发热（P=0.016）有关， SLE患者FASLG mRNA表达与皮疹（P=0.023）和面部红斑（P=0.029）有关；而对SLE患者FAS和FASLG mRNA水平与主要实验室特征之间的研究均未发现统计学关联（P0.05）。 （4）FAS和FASLG基因多态性与mRNA水平的关系：将69名研究对象FAS基因位点rs2234767和rs1800682以及FASLG基因位点rs763110的基因分型结果，按3个位点的基因型分组比较mRNA表达水平，结果均未显示统计学差异。 结论SLE患者FAS mRNA表达水平升高，且活动期患者表达水平高于非活动期患者。FAS mRNA和FASLG mRNA表达水平与部分临床特征有关。但未发现FAS（rs2234767，rs1800682）和FASLG（rs763110）多态性与mRNA水平的关联。
【关键词】：
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R593.241
【目录】：
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本文编号：245769
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