POLD3在胃腺癌中的表达及临床意义分析

发布时间：2017-10-09 21:35

  本文关键词：POLD3在胃腺癌中的表达及临床意义分析

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【摘要】：目的胃腺癌(gastric adenocarcinoma, GAC)属于消化道恶性上皮性肿瘤,目前发病率仍高居我国男性恶性肿瘤第二位,死亡率为男性恶性肿瘤患者的前三位。DNA聚合酶δ (DNA polymerase delta, POLD)是真核细胞DNA聚合酶B族中的一员,广泛参与生物体内DNA的复制及损伤修复过程,其第三亚基(DNA polymerase delta 3, POLD3)作为POLD的辅助亚基,在POLD参与的各项生命活动中均处于核心地位。目前在对POLD3与癌症的关系研究中,能够明确的是POLD3的突变体增加结直肠癌的发病风险、卵巢癌预后不良患者中POLD3的表达下调,但其与胃癌的关系暂未见报道。本课题通过免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)、蛋白印迹(western blotting, WB)、实时定量多聚酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-q PCR)、体外细胞学等技术检测GAC组织与胃腺癌细胞系中POLD3的表达水平,分析了POLD3表达对GAC增殖、分化及预后等影响。方法1.收集2005年1月至2008年12月期间在右江民族医学院附属医院住院的经病理确诊的、接受了根治性手术切除的GAC临床Ⅰ-Ⅱ期病例；收集所有研究对象的手术切除石蜡标本和适量新鲜组织用于POLD3表达分析；同时,收集所有研究对象的相关临床病理资料及生存随访资料,随访截止日期至2014年12月。2.使用IHC检测POLD3蛋白在GAC肿瘤组织及肿瘤旁组织的表达情况,通过t检验分析POLD3在肿瘤组织与肿瘤旁组织间的表达差异；使用卡方检验、非条件Logistic回归方法分析肿瘤组织中POLD3表达与GAC临床病理特征的关系；通过Kaplan-Meier法绘制生存曲线并计算中位生存期(Median survival time, MST),通过多因素风险比例回归模型计算POLD3对GAC总体死亡风险值。3.使用RT-q PCR技术检测POLD3 mRNA在10例肿瘤组织与肿瘤旁组织的表达情况,通过t检验比较分析POLD3 mRNA在肿瘤组织与肿瘤旁组织间的表达差异。4.常规培养2株人胃腺癌细胞系及1株人非肿瘤胃黏膜上皮细胞株,通过WB和RT-q PCR分别检测各培养细胞系中POLD3蛋白和mRNA的表达水平。5.通过分子克隆技术检测分析体外过表达POLD3对GAC细胞增殖的影响。结果1.当前研究共收集到符合要求的TNM分期为Ⅰ-Ⅱ期的GAC患者共82例,男性和女性分别为58例(70.7%)和24例(29.3%),平均年龄53.17±11.19岁,其中早期胃癌4例(4.9%),进展期胃癌78例(95.1%),高分化者或中分化者占65.9%(54/82)、低或未分化者占34.1(28/82)。2.与肿瘤旁组织相比,POLD3蛋白在GAC肿瘤组织中表达水平减少(P=4.26×10-14)；体外细胞学实验有相似发现。3.与肿瘤旁组织相比,POLD3 mRNA在GAC肿瘤组织中表达水平减少(P=8.00×10-6)；体外细胞学实验有相似发现(P=7.20×10-5)。4.与低POLD3表达者相比,高POLD3表达者其肿瘤组织分化程度更高,对应贡献值为5.00(1.35-18.48),P值为0.016；体外细胞学实验有相似发现。5.POLD3表达影响胃腺癌肿瘤大小,肿瘤直径较大者,肿瘤组织中POLD3蛋白表达水平较低,Logistic回归分析表明高POLD3表达者,抑制肿瘤生长的贡献值为5.78(1.55-21.51),对应P值为0.009。6.POLD3表达影响体外培养胃腺癌细胞增殖,与空载或空白对照相比,低POLD3表达的MKN-45细胞株在接受了POLD3过表达载体后,其生长速度明显受到抑制(P0.05)。7.POLD3表达水平影响胃腺癌患者的预后：高和低表达对应中位总体生存期分别为34和16个月(P0.01),低POLD3表达者其总体死亡风险为高表达者2.43倍(可信区间为1.25-4.71)。结论POLD3在GAC肿瘤中表达下调,这种下调与肿瘤分化、增殖及不良预后均相关。
【关键词】：POLD3 胃腺癌 表达 临床意义
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 个人简历3-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-14
• 前言14-16
• 材料与方法16-52
• 1. 主要材料与试剂16-18
• 2. 主要仪器18-19
• 3. 研究对象19-21
• 4. 细胞系与细胞培养21-26
• 5. 载体构建26-36
• 6. 免疫组织化学36-40
• 7 蛋白免疫印迹40-45
• 8 POLD3 mRNA检测技术45-48
• 9. 细胞增殖分析48-50
• 10. 统计学处理50-52
• 结果52-63
• 1. 研究对象的基本特征52
• 2. POLD3蛋白在胃腺癌中的表达情况52-56
• 3. POLD3 mRNA在胃腺癌中的表达情况56-58
• 4. POLD3表达与胃腺癌肿瘤分化的关系58-59
• 5. POLD3表达对胃腺癌增殖的影响59-62
• 6. POLD3表达对胃腺癌患者预后的影响62-63
• 讨论63-69
• 参考文献69-77
• 综述 DNA聚合酶delta研究进展77-92
• 参考文献85-92
• 致谢92-94
• 攻读研究生期间发表的学术论文目录94-95
• 附录95-99

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本文编号：1002575