P-糖蛋白与胰腺癌吉西他滨治疗敏感性的关系及机制探讨

发布时间：2017-10-10 17:39

  本文关键词：P-糖蛋白与胰腺癌吉西他滨治疗敏感性的关系及机制探讨

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【摘要】：目的：(1)研究P-糖蛋白(P-gp)的表达与胰腺癌吉西他滨治疗敏感性的关系。(2)研究肿瘤坏死因子相关凋亡配体(TRAIL)联合吉西他滨(GEM)对人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株SW1990/GEM的效应,并探索产生效应的可能分子生物学机制。方法：(1)应用免疫组织化学法检测胰腺癌术后患者的P-gp的表达水平。(2)应用生存分析探讨P-gp的表达水平对术后吉西他滨化疗组和非吉西他滨化疗组胰腺癌病人总生存期(OS)及无病生存期(DFS)的影响。(3)应用CCK8法鉴定人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株SW1990/GEM,确定耐药指数。(4)应用CCK8法筛选肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对人胰腺癌细胞株SW1990/GEM的亚毒性剂量。(5)应用CCK8法及金氏公式筛选亚毒性剂量TRAIL与GEM的最佳联合方案。(6)应用流式细胞术检测TRAIL和GEM单独或联合干预SW1990/GEM后的细胞凋亡率。(7)用Western Blot法检测TRAIL和GEM单独或联合干预SW1990/GEM后, P-gp、 Bcl-2、Bax 及 Cleaved-caspase3的表达情况。结果：(1)P-gp在胰腺癌术后组织中的阳性表达率为56.96%(45/79),其阳性表达主要表现在细胞膜或细胞浆内出现棕黄色颗粒。此外,P-gp的表达与胰腺癌术后病人的临床病理参数均无相关性。(2)生存分析结果显示,针对胰腺癌术后病人的OS及DFS, P-gp阳性表达组与阴性表达组比较差异均无统计学意义,P-gp的表达可能是胰腺癌术后吉西他滨辅助化疗患者OS及DFS的独立预后因素。(3)SW1990的IC50为5.93±0.08μmol/L, SW1990/GEM的IC50为178.70±20.32μmol/L, SW1990/GEM的耐药指数为30.13。(4)CCK8结果显示：亚毒性剂量TRAIL联合GEM对SW1990/GEM细胞的生长抑制率超过两者单独使用(P0.05),两药具有协同作用。GEM为100μmol/L时协同指数最高。(5)流式细胞术结果显示：GEM联合TRAIL组细胞凋亡较单药组显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。(6)Western Blot结果显示：与单药组比较,GEM联合TRAIL组Bcl-2、P-gp的表达下降,Bax、Cleaved-caspase3的表达上升,差异有统计学意义(P0.05)。结论：(1)P-gp的表达可能是胰腺癌术后吉西他滨疗效的独立预后因素之一。(2)TRAIL与GEM联合具有协同抑制胰腺癌细胞株SW1990/GEM活性、显著增加凋亡率的作用。(3)TRAIL在体外具有提高人胰腺癌细胞株SW1990/GEM对吉西他滨的敏感性的作用；(4)TRAIL可能是通过上调Bax、Cleaved-caspase3的表达、下调Bcl-2、P-gp的表达来提SW1990/GEM对GEM敏感性。
【关键词】：胰腺癌 P-糖蛋白 耐药 吉西他滨
【学位授予单位】：福建中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.9
【目录】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 第一部分 P-gP与胰腺癌吉西他滨治疗敏感性的关系13-21
• 1 临床资料13
• 1.1 病例来源13
• 1.2 病例纳入标准13
• 1.3 病例排除标准13
• 1.4 病例分组13
• 2 研究方法13-14
• 2.1 病例临床资料及随访资料整理13-14
• 2.2 免疫组化法测P-gp表达14
• 2.3 P-gp免疫组化实验结果判定14
• 2.4 统计学分析14
• 3 结果14-19
• 3.1 入组病例临床病理特征分析14-15
• 3.2 P-gp的表达与胰腺癌临床病理参数的关系15-17
• 3.3 P-gp的表达与胰腺癌术后吉西他滨辅助化疗患者OS及DFS的关系17
• 3.4 P-gp蛋白表达和胰腺癌术后患者OS及DFS的相关性分析17-19
• 4 分析与讨论19-20
• 4.1 P-gp在胰腺癌组织中的表达特点19
• 4.2 P-gp与术后胰腺癌吉西他滨敏感性的关系19-20
• 5 结论20-21
• 第二部分 TRAIL联合吉西他滨杀伤SW1990/GEM的研究21-30
• 1 实验材料21
• 1.1 实验细胞株21
• 1.2 实验试剂及实验仪器21
• 2 实验方法21-22
• 2.1 细胞培养21
• 2.2 CCK8法体外检测细胞的增殖抑制作用21
• 2.3 流式细胞仪检测细胞凋亡率21
• 2.4 Western Blot检测TRAIL干预对细胞凋亡相关蛋白表达的影响21
• 2.5 两药相互作用指数计算21-22
• 2.6 统计学分析22
• 3 实验结果22-27
• 3.1 胰腺癌吉西他滨耐药细胞SW1990/GEM的耐药指数鉴定22-23
• 3.2 SW1990/GEM细胞对不同浓度TRAIL的敏感程度23
• 3.3 TRAIL联合吉西他滨干预对SW1990/GEM细胞增殖的影响23-24
• 3.4 TRAIL联合吉西他滨干预SW1990/GEM对细胞凋亡的影响24-25
• 3.5 TRAIL联合吉西他滨提高SW1990/GEM对GEM敏感性的可能机制25-27
• 4 分析与讨论27-29
• 4.1 GEM和TRAIL对SW1990/GEM细胞的体外抗肿瘤作用27-28
• 4.2 TRAIL和GEM联合提高SW1990/GEM对GEM敏感性的可能机制28-29
• 5 结论29-30
• 参考文献30-32
• 附录32-43
• 致谢43-44
• 文献综述44-49
• 参考文献46-49
• 作者简历49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 徐巧元;陈晏林;;P-gp在结直肠癌中的表达及临床意义[J];重庆医学;2009年20期

2 李雪甫;王永实;;肿瘤的多药耐药研究进展[J];淮海医药;2013年01期

3 智迎辉;宋茂民;龙锦;郭仁宣;;P-gp、GST-π和P53在胆囊癌中的表达及意义[J];世界华人消化杂志;2009年36期

4 要洁;冯奉仪;林晨;张雪燕;付明;梁萧;杨莹;;吉西他滨耐药胰腺癌细胞系的耐药机制[J];中华肿瘤杂志;2005年12期

5 袁田;廖泉;赵玉沛;;吉西他滨代谢酶与胰腺癌化疗耐药关系的研究进展[J];中国普外基础与临床杂志;2009年08期

6 陈万青;张思维;郑荣寿;曾红梅;邹小农;赵平;吴良有;李光琳;赫捷;;中国2009年恶性肿瘤发病和死亡分析[J];中国肿瘤;2013年01期

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本文编号：1007711