基于微流控芯片技术研究肺癌细胞EMT发生前后对成骨细胞的影响

发布时间：2017-10-10 22:10

  本文关键词：基于微流控芯片技术研究肺癌细胞EMT发生前后对成骨细胞的影响

  更多相关文章： 微流控芯片 共培养 微环境 骨转移

【摘要】：目的:应用微流控芯片技术,构建一个人肺腺癌细胞A549、成纤维细胞WI38及人成骨细胞h FOB共培养模型。研究成纤维细胞WI38对肺癌细胞A549发生EMT的促进作用,以及发生EMT的A549细胞对h FOB细胞表达RANKL蛋白的影响(RANKL可促进破骨细胞成熟),进而比较A549细胞发生EMT前后影响成骨细胞h FOB该蛋白表达的差异,为临床干预肿瘤细胞EMT发生及缓解肺癌骨转移引起的溶骨性症状提供治疗参考。方法:应用微流控芯片技术,构建一个共培养平台,芯片结构包括微通道,细胞培养室,进液孔与出液孔。在芯片中分别培养包括肺腺癌细胞A549、成纤维细胞WI38、成骨细胞h FOB在内的3种细胞系。实验对象共分为3组,分别为对照组:h FOB单独培养,实验组1:A549与人类成骨细胞h FOB共培养以及实验组2:发生EMT的A549与h FOB共培养。通过免疫荧光方法分别检测对照组、实验组1、实验组2中人类成骨细胞h FOB膜蛋白RANKL的表达差异,并通过常规Transwell侵袭实验、Western blot检测对芯片结果进行验证。结果:1.将肿瘤细胞细胞A549与成纤维细胞WI38共培养后,可见A549发生EMT转化。相关蛋白如E-Cadherin表达降低、Snail表达升高。Transwell实验结果显示,发生EMT的A549侵袭能力增强。2.将发生EMT的A549与成骨细胞h FOB共培养,E-Cadherein与Snail表达降低。Transwell实验证明细胞具有向靶器官侵袭能力。3.将对照组、实验组1、实验组2分别提取蛋白,行Western blot检测成骨细胞RANKL蛋白,结果显示A549细胞发生EMT前后均可使成骨细胞RANKL表达升高。结论:本实验通过微流控芯片技术,成功建立细胞共培养体系,模拟了肿瘤微环境中成纤维细胞WI38对肺癌细胞A549的促EMT作用,并比较了A549发生EMT前后对成骨细胞h FOB的影响,从而证实A549细胞发生EMT前后均有促进溶骨性改变的能力。实验为临床研究肺癌骨转移或其他肿瘤的靶器官转移提供了新的方法,同时为预防及治疗肿瘤侵袭、转移提供体外实验依据。
【关键词】：微流控芯片 共培养 微环境 骨转移
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要7-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-20
• 1. 材料12-14
• 1.1 细胞系12
• 1.2 主要试剂及配置12-13
• 1.3 相关仪器13-14
• 2. 方法14-20
• 2.1 微流控芯片细胞培养平台的构建14-15
• 2.2 细胞的常规复苏、培养、传代及冻存15-16
• 2.3 微流控芯片中细胞的培养16
• 2.4 微流控芯片平台免疫荧光检测16-17
• 2.5 Transwell平台细胞共培养17
• 2.6 Transwell侵袭实验17-18
• 2.7 Western blot实验18-20
• 2.8 统计学分析20
• 结果20-26
• 1. 微流控芯片构建20-21
• 2. 芯片平台研究肺癌细胞EMT前后对成骨细胞的影响21-23
• 3. 常规平台研究肺癌细胞EMT前后对成骨细胞的影响23-26
• 结论26
• 讨论26-28
• 病例分析28-29
• 参考文献29-31
• 综述31-36
• 参考文献34-36
• 致谢36-37

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本文编号：1008872