QIC2抑制CBS表达诱导肝癌细胞凋亡的研究

发布时间：2017-10-11 03:28

  本文关键词：QIC2抑制CBS表达诱导肝癌细胞凋亡的研究

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【摘要】：目的:探究胱硫醚-β-合酶(cystathionine-β-synthase,CBS)在肝癌细胞中的作用及QIC2诱导肝癌细胞凋亡的作用及机制。方法:RT-PCR及Western blot方法检测CBS在肝癌及肝正常细胞中的表达水平;MTT及EdU检测下调CBS的表达或抑制CBS的活性对肝癌细胞生长增殖的影响;流式细胞仪分析下调CBS的表达对肝癌细胞凋亡的影响;Western blot检测下调CBS的表达对凋亡相关蛋白及HO-1蛋白表达的影响;通过Western blot及MTT法从化合物QICs(QIC0,QIC1,QIC2和QIC3)中筛选具有抗肝癌活性的CBS抑制剂;应用MTT方法检测筛选出的QIC2对肝癌SMMC-7721细胞的抗癌活性,以阿霉素和苏尼替尼为阳性对照;采用EdU实验检测QIC2对肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响;流式细胞仪分析QIC2对肝癌SMMC-7721细胞周期及细胞凋亡的影响;Western blot方法检测QIC2对肝癌SMMC-7721细胞中CBS、HO-1以及凋亡相关蛋白表达的影响;DCF法检测细胞内ROS水平;DTNB法检测细胞内GSH水平。结果:1、RT-PCR及Western blot结果显示,与人正常肝细胞比较,在肝癌SMMC-7721及HepG2细胞中CBS mRNA和蛋白水平均呈过表达。2、下调CBS表达或抑制CBS活性可抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长和增殖。3、下调CBS表达或抑制CBS活性可诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡,增加凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值,激活caspase-3级联反应。4、下调CBS表达可抑制肝癌SMMC-7721细胞中HO-1表达,并增加细胞内的ROS水平。5、QICs类化合物中,QIC2明显抑制肝癌SMMC-7721细胞中CBS的表达及肝癌SMMC-7721细胞的生长。6、QIC2对肝癌SMMC-7721细胞的抑制活性明显强于阳性对照苏尼替尼,但弱于阳性对照阿霉素。7、QIC2可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖。8、QIC2可诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡,激活caspase 3级联反应。9、QIC2可抑制肝癌SMMC-7721细胞中HO-1表达,增加细胞中ROS水平,降低细胞中GSH水平,由此增加细胞的氧化应激。结论:1、CBS可调控肝癌细胞的生长、增殖及凋亡。2、CBS对肝癌细胞凋亡的调控作用可能与氧化应激有关。3、QIC2可能通过下调CBS的表达,抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长及增殖。4、QIC2可能通过增加细胞的氧化应激来诱导肝癌SMMC-7721细胞的凋亡。
【关键词】：QIC2化合物 CBS/H_2S体系 抗肝癌活性 氧化应激
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 第一章 引言11-13
• 第二章 CBS在肝癌细胞中的生物学作用13-33
• 2.1 实验材料13-20
• 2.1.1 主要仪器13-14
• 2.1.2 细胞株14
• 2.1.3 药品和试剂14-16
• 2.1.4 试剂与药品的配制16-20
• 2.2 实验方法20-24
• 2.2.1 细胞培养20
• 2.2.2 RT-PCR20-21
• 2.2.3 siRNA转染21-22
• 2.2.4 Western Blot22
• 2.2.5 MTT检测细胞活性22-23
• 2.2.6 Edu assay23
• 2.2.7 细胞凋亡检测23-24
• 2.2.8 活性氧检测24
• 2.2.9 内源性硫化氢的检测24
• 2.2.10 统计学分析24
• 2.3 实验结果24-30
• 2.3.1 CBS在肝正常细胞和肝癌细胞中的表达水平24-25
• 2.3.2 抑制CBS的表达及活性对肝癌细胞内源性硫化氢的释放及细胞生长的影响25-27
• 2.3.3 抑制CBS的表达对肝癌细胞增殖的影响27-28
• 2.3.4 抑制CBS对凋亡及凋亡相关蛋白的影响28-29
• 2.3.5 抑制CBS对HO-1 蛋白以及氧化应激的影响29-30
• 2.4 讨论30-31
• 2.5 小结31-33
• 第三章 QIC2对肝癌细胞的作用与机制研究33-51
• 3.1 实验材料33-39
• 3.1.1 主要仪器33-34
• 3.1.2 细胞株34
• 3.1.3 药品和试剂34-35
• 3.1.4 试剂与药品的配制35-39
• 3.2 实验方法39-42
• 3.2.1 细胞培养39
• 3.2.2 Western Blot39-40
• 3.2.3 MTT检测细胞活性40
• 3.2.4 Edu assay40
• 3.2.5 活性氧检测40-41
• 3.2.6 GSSG和GSH检测41
• 3.2.7 内源性硫化氢的检测41-42
• 3.2.8 细胞凋亡检测42
• 3.2.9 统计学分析42
• 3.3 实验结果42-48
• 3.3.1 AOAA对肝癌细胞和肝正常细胞生长的影响42-43
• 3.3.2 C类化合物对肝癌SMMC-7721细胞中CBS表达及细胞活性的影响43-44
• 3.3.3 QIC2对肝癌SMMC-7721细胞生长的影响44
• 3.3.4 QIC2对肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响44-45
• 3.3.5 QIC2对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响45-46
• 3.3.6 QIC2对肝癌细胞CBS /硫化氢系统和氧化应激影响46-48
• 3.4 讨论48-50
• 3.5 小结50-51
• 参考文献51-55
• 附录55-57
• 致谢57-59
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文59-60

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