沉默TIGAR增加β-七叶皂苷钠对肠癌细胞抗肿瘤作用的机制研究

发布时间：2017-10-11 04:26

  本文关键词：沉默TIGAR增加β-七叶皂苷钠对肠癌细胞抗肿瘤作用的机制研究

  更多相关文章： β-七叶皂苷钠 TIGAR 凋亡 DNA损伤

【摘要】：目的:研究β-七叶皂苷钠对肠癌细胞TIGAR(TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator)蛋白表达的影响,并研究TIGAR在β-七叶皂苷钠对肠癌细胞抗肿瘤治疗中的作用,进一步探讨TIGAR影响β-七叶皂苷钠对肠癌细胞的抗肿瘤作用的相关机制。方法:通过Western Blot法,研究β-七叶皂苷钠对肠癌细胞HCT116 TIGAR蛋白表达的影响;采用小干扰RNA技术沉默肠癌细胞TIGAR表达后通过CCK-8及克隆形成实验分别检测沉默TIGAR表达结合β-七叶皂苷钠治疗对肠癌细胞HCT116生存总体情况的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测β-七叶皂苷钠治疗联合沉默TIGAR对肠癌细胞HCT116凋亡的影响情况,并用Western blot检测凋亡相关蛋白如PARP、Bcl-2、Bax、Caspase-3;2’,7’-二氯二氢荧光素双醋酸盐(DCFH2-DA)标记流式细胞术、二氢乙啶(Dihydroethidium,DHE)探针标记细胞检测细胞内活性氧(ROS)水平;彗星实验检测HCT116细胞DNA损伤情况;Western Blot检测经过相应实验处理后HCT116细胞的DNA损伤标志蛋白γ-H2AX,和DNA损伤修复相关蛋白,如p-ATM、Cdk5的表达。结果:研究β-七叶皂苷钠对肠癌细胞HCT116TIGAR表达的影响,我们使用不同浓度的β-七叶皂苷钠作用于肠癌HCT116细胞,结果显示:较低浓度的β-七叶皂苷钠可诱导HCT116细胞TIGAR表达上调,浓度40μg/ml时最高,之后表达下降;下一步研究β-七叶皂苷钠作用于肠癌HCT116细胞不同时间后TIGAR的变化情况,结果显示:较短时间内的β-七叶皂苷钠可诱导HCT116细胞TIGAR表达上调,但是经过较长时间β-七叶皂苷钠作用后,我们观察到TIGAR表达会有下调的表现。为了探讨β-七叶皂苷钠诱导的TIGAR高表达对肠癌细胞HCT116抗肿瘤治疗中的作用,我们首先利用TIGAR siRNA沉默肠癌细胞HCT116 TIGAR表达,然后通过CCK8实验、克隆形成实验和流式细胞术检测其处理的效果,结果发现,沉默TIGAR表达联合β-七叶皂苷钠作用后,肠癌HCT116细胞的存活率出现显著下降,并且细胞凋亡显著增加。肿瘤的治疗与多种机制相关,其中ROS适应性反应、细胞凋亡及细胞DNA损伤修复在肿瘤治疗的形成中起着重要作用,TIGAR位于p53的下游基因,能抑制细胞糖酵解过程,而增加磷酸戊糖通路(PPP)产生的NADPH从而降低细胞内ROS的含量,接着降低了ROS导致的细胞凋亡和ROS诱导的DNA损伤修复。所以,为了进一步探讨β-七叶皂苷钠对肠癌细胞抗肿瘤作用的机制,我们分别从细胞凋亡、细胞DNA损伤修复两个方面来进行研究。首先,沉默TIGAR表达显著增加β-七叶皂苷钠所诱导的肠癌细胞HCT116的凋亡,这些结果与ROS水平增加、Caspase-3激活等相关。以上结果显示,沉默TIGAR表达增加β-七叶皂苷钠对肠癌细胞的治疗效果与沉默TIGAR表达增加细胞凋亡有关。其次,沉默TIGAR表达亦可显著增加β-七叶皂苷钠所导致的肠癌细胞DNA损伤,当我们给予PPP通路产物NADPH时,我们发现可部分减轻DNA损伤情况。提示:沉默TIGAR表达除了通过抑制PPP通路增加β-七叶皂苷钠诱导的肝癌细胞DNA损伤外,还有其他机制的存在。随后的实验发现,TIGAR是通过调节Cdk5-ATM信号通路,参与细胞DNA损伤修复的过程。综上所述,TIGAR通过两条途径(即PPP途径和Cdk5-AMT信号通路)调控β-七叶皂苷钠对肠癌细胞DNA的损伤与修复,影响β-七叶皂苷钠对肠癌细胞抗肿瘤治疗效果。结论:β-七叶皂苷钠诱导肠癌细胞HCT116 TIGAR的表达;沉默TIGAR表达增加β-七叶皂苷钠对肠癌细胞的抗肿瘤敏感性,其机制涉及细胞凋亡增加、细胞DNA的损伤与修复。TIGAR表达在β-七叶皂苷钠对肠癌细胞的抗肿瘤治疗中的作用提示TIGAR成为抗肿瘤治疗作用靶点的可能,也为临床抗肿瘤治疗尤其是β-七叶皂苷钠对肠癌的抗肿瘤治疗提供理论基础及依据。
【关键词】：β-七叶皂苷钠 TIGAR 凋亡 DNA损伤
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.3
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 研究背景9-12
• 第一部分 沉默TIGAR通过调控细胞凋亡增加 β-七叶皂苷钠的抗肿瘤作用12-25
• 第一节 β-七叶皂苷钠诱导肠癌细胞TIGAR表达12-17
• 第二节 沉默TIGAR表达增加 β-七叶皂苷钠对肠癌细胞的抗肿瘤作用17-25
• 第二部分 沉默TIGAR通过调控DNA损伤修复增加 β-七叶皂苷钠的抗肿瘤作用25-33
• 第一节 沉默TIGAR表达增加 β-七叶皂苷钠诱导的肠癌细胞DNA损伤25-29
• 第二节 沉默TIGAR增加 β-七叶皂苷钠诱导的肠癌细胞DNA损伤的机制研究29-33
• 讨论33-37
• 全文结论37-38
• 参考文献38-41
• 综述41-51
• 参考文献48-51
• 英文缩写词表51-52
• 攻读学位期间公开发表的论文52-53
• 致谢53-54

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本文编号：1010469