3T3、MCF-7和B16细胞的电化学行为

发布时间：2017-10-13 18:29

  本文关键词：3T3、MCF-7和B16细胞的电化学行为

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【摘要】：目的通过应用电化学方法对人体内乳腺癌细胞(MCF-7)、黑色素瘤细胞(B16)以及小鼠成纤维细胞(3T3)进行研究,考察了不同分泌时间对三种细胞电化学信号的影响,建立一种能够区分正常细胞和肿瘤细胞的电化学方法。在三种细胞的裂解液中分别加入黄嘌呤氧化酶(XOD),采用电化学方法对细胞中的四种嘌呤:腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、黄嘌呤(X)和次黄嘌呤(H)含量进行测定。方法本文选取细胞3T3、MCF-7、B16作为模型细胞,采用电化学循环伏安法对三种细胞进行电化学测试,采用高效液相色谱法(HPLC)对三种细胞的电化学循环伏安曲线进行归属;并应用电化学方法检测不同分泌时间三种细胞电化学信号的变化情况,同时对三种细胞中腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤和次黄嘌呤的含量进行测定。结果在细胞分泌实验中,3T3细胞在分泌60分钟时,电化学信号PeakⅠ和PeakⅡ达到最大值;MCF-7细胞在分泌40分钟时,电化学信号PeakⅠ和PeakⅡ达到最大值;B16细胞在分泌50分钟时,电化学信号PeakⅠ和PeakⅡ达到最大值。由实验结果可以得出:肿瘤细胞的分泌能力远远高于正常细胞。在对3T3、MCF-7以及B16细胞中四种嘌呤含量的定量分析试验中,加入黄嘌呤氧化酶后,三种细胞的电化学信号PeakⅠ和PeakⅡ均减小了,并产生了尿酸峰。通过对PeakⅠ和PeakⅡ原有的量和减少的量进行减法计算,既得三种细胞中四种嘌呤的含量。结论本实验采用电化学法考察不同分泌时间对三种细胞电化学信号的变化,建立电化学方法探索正常细胞和肿瘤细胞的区别。并在三种细胞的细胞裂解液中加入黄嘌呤氧化酶,建立采用电化学方法检测细胞中四种嘌呤含量的方法。
【关键词】：小鼠成纤维细胞(3T3) 人乳腺癌细胞(MCF-7) 黑色素瘤细胞(B16) 黄嘌呤氧化酶(XOD) 电化学
【学位授予单位】：佳木斯大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R73-3
【目录】：

• 摘要7-8
• Abstract8-10
• 前言10-11
• 第1章 文献综述11-18
• 1.1 肿瘤细胞的特点11
• 1.2 正常细胞变为肿瘤细胞的转换过程11-12
• 1.3 细胞电化学法在细胞中嘌呤检测方面的应用12-15
• 1.3.1 细胞中嘌呤含量的检测方法12-13
• 1.3.2 细胞电化学的应用13-15
• 1.4 黄嘌呤氧化酶15-18
• 第2章 细胞 3T3、MCF-7 和 B16 的电化学伏安检测18-29
• 2.1 实验材料、试剂与仪器18-19
• 2.1.1 实验仪器18
• 2.1.2 实验试剂18
• 2.1.3 实验材料18-19
• 2.2 实验方法19-22
• 2.2.1 容器的预处理19
• 2.2.2 细胞完全培养基的配制19
• 2.2.3 PBS缓冲溶液的配制19-20
• 2.2.4 胰酶的配置20
• 2.2.5 细胞的培养20-21
• 2.2.6 嘌呤标准溶液的配制21
• 2.2.7 电极的制备21
• 2.2.8 电化学检测条件21
• 2.2.9 电化学测定系统21
• 2.2.10 3T3、B16、MCF-7 细胞裂解液的伏安行为检测21
• 2.2.11 3T3、B16、MCF-7 细胞裂解液经酶氧化后的伏安行为检测21-22
• 2.3 结果与讨论22-28
• 2.3.1 四种嘌呤标准品的电化学行为22-23
• 2.3.2 3T3细胞的电化学行为23-25
• 2.3.3 MCF-7 细胞的电化学行为25-26
• 2.3.4 B16细胞的电化学行为26-28
• 2.4 小结28-29
• 第3章 3T3、B16、MCF-7 细胞分泌不同时间的电化学行为29-34
• 3.1 实验材料、试剂与仪器29-30
• 3.1.1 实验仪器29
• 3.1.2 实验试剂29
• 3.1.3 实验材料29-30
• 3.2 实验方法30
• 3.2.1 不同分泌时间 3T3、B16、MCF-7 细胞悬浮液的伏安行为检测30
• 3.3 结果与讨论30-33
• 3.3.1 3T3细胞分泌的电化学行为30-31
• 3.3.2 MCF-7 细胞分泌的电化学行为31-32
• 3.3.3 B16细胞分泌的电化学行为32-33
• 3.4 小结33-34
• 第4章 HPLC法检测 3T3、B16、MCF-7 细胞裂解液上清液的研究34-40
• 4.1 仪器与材料34
• 4.1.1 仪器34
• 4.1.2 试验试剂34
• 4.1.3 材料34
• 4.2 试验34-35
• 4.2.1 配制流动相34
• 4.2.2 配制标准品储存液34-35
• 4.2.3 细胞样品的收集及处理35
• 4.2.4 HPLC检测的条件35
• 4.3 结果与讨论35-39
• 4.3.1 四种嘌呤标准品的 HPLC 检测35-38
• 4.3.2 3T3、MCF-7 和 B16 三种细胞的高效液相检测38-39
• 4.4 小结39-40
• 结论40-41
• 参考文献41-49
• 致谢49-50
• 英文缩写50-51
• 攻读学位期间发表的学术论文51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 何泽涌;;从分子水平看细胞的肿瘤化[J];山西医药杂志;1981年02期

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本文编号：1026448