ONECUT2基因沉默抑制卵巢癌细胞增殖、转移和血管新生
本文关键词：ONECUT2基因沉默抑制卵巢癌细胞增殖、转移和血管新生
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【摘要】：目的:ONECUT2(One Cut Homeobox 2,OC-2)是一个新发现的与肿瘤细胞增殖、血管新生和转移相关的转录因子,同时,它也与癌细胞的EMT(Epithelial Mesenchymal Transition,EMT)过程密切相关。本文目的在于明确OC-2基因在卵巢癌中出现的异常表达情况,同时,通过siRNA沉默OC-2基因,明确OC-2在卵巢癌发生发展中的作用机制以及对癌细胞增殖、迁移和血管新生的影响。方法:采用实时荧光定量PCR的方法,检测了OC-2在不同卵巢癌细胞系中的相对表达情况。收集了10例患者卵巢癌组织及2例正常卵巢组织,用免疫组化的方法检查OC-2蛋白的表达情况。CCK-8实验检验siRNA沉默OC-2基因对卵巢癌细胞增殖的影响。Transwell迁移/侵袭实验和划痕实验检测siRNA沉默OC-2基因对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响。构建卵巢癌裸鼠模型,检测si RNA沉默OC-2基因对肿瘤生长和血管新生的影响。结果:1.OC-2在卵巢癌细胞系中存在差异表达,COV-504和SKOV3细胞中OC-2基因m RNA转录水平很蛋白翻译水平都较高。检测的10例患者卵巢癌组织,其中6例出现OC-2阳性表达,2例正常卵巢组织都呈现OC-2阴性。2.SiRNA对COV-504、SKOV3中OC-2蛋白表达平均抑制率为85%和86%;CCK-8实验表明siRNA对COV-504、SKOV3细胞的增殖的抑制率平均为11%和10%,抑制率随时间增高,在48h达到最高;Transwell实验证明siRNA对COV-504、SKOV3迁移的抑制率平均为74%和76%;划痕实验证明siRNA对COV-504、SKOV3迁移的抑制率平均为87%和88%;侵袭实验证明siRNA对COV-504、SKOV3侵袭的抑制率平均为71%和77%;成管实验证明siRNA对COV-504、SKOV3诱导内皮细胞成管的抑制率平均为61%和60%;SiRNA对COV-504细胞p-Akt和p-Erk蛋白的抑制率分别平均为81%和47%,对SKOV3细胞p-Akt和p-Erk蛋白的抑制率分别平均为91%和95%;用siRNA沉默COV-504细胞中的OC-2基因对N-cadherin的抑制率平均为63%,上调E-cadherin 209%;对SKOV3N-cadherin的抑制率为14%,上调E-cadherin 268%。3.构建的SKOV3细胞裸鼠模型,siRNA沉默OC-2基因对肿瘤质量和肿瘤组织微血管密度的抑制率分别为93%和78%,肿瘤体积显著小于同时期阴性对照组。结论:OC-2基因在不同卵巢癌细胞株和患者卵巢癌组织中出现差异表达。CCK-8实验证明siRNA沉默OC-2基因可以抑制卵巢癌细胞的增殖;Transwell实验和划痕实验证明,siRNA沉默OC-2基因抑制卵巢癌细胞迁移;侵袭实验和成管实验结果表明,OC-2被抑制后,卵巢癌细胞侵袭和诱导血管新生被显著抑制;Western Blot实验证明OC-2可以通过调节Akt/Erk信号通路而实现调控作用。SiRNA沉默OC-2基因后,卵巢癌细胞均出现N-cadherin的下调和E-cadherin的上调则提示OC-2是一个EMT相关的转录因子。SKOV3裸鼠肿瘤模型证明,siRNA处理后的卵巢癌细胞成瘤的体积和肿瘤重量均显著被抑制,肿瘤组织微血密度也更低。总之,siRNA沉默OC-2抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和血管新生。
【关键词】：ONECUT2 EMT angiogenesis metastersis
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31
【目录】：
- 摘要3-5
- Abstract5-9
- 第一部分 前言9-18
- 1. ONECUT2 生物学特性及研究背景9-11
- 2. RNA 干扰11-14
- 3.上皮间充质转化 (Epithelial mesenchymal Transition，EMT)14-16
- 4. 研究目的及意义16-17
- 5. 技术路线17-18
- 第二部分 实验材料与方法18-35
- 1. 实验材料18-22
- 2. 实验方法22-35
- 第三部分 结果与分析35-54
- 1. OC-2 基因在不同卵巢癌细胞株中的表达35
- 2. OC-2 基因在不同卵巢癌细胞株中蛋白表达的差异35-36
- 3. 患者卵巢癌组织中OC-2 基因的表达36-38
- 4. Si RNA沉默卵巢癌细胞中OC-2 基因的表达38-40
- 5. Si RNA沉默OC-2 基因抑制卵巢癌细胞的增殖40-41
- 6. Si RNA沉默OC-2 基因抑制卵巢癌细胞的迁移(Transwell)41-42
- 7. Si RNA沉默OC-2 基因抑制卵巢癌细胞的侵袭42-44
- 8. Si RNA沉默OC-2 基因抑制卵巢癌细胞迁移(划痕实验)44-46
- 9. 沉默OC-2 基因后卵巢癌培养上清对内皮细胞的成管的影响46-48
- 10. Si RNA沉默OC-2 基因对卵巢癌细胞信号通路的影响48-50
- 11. 沉默OC-2 基因对SKOV3裸鼠模型肿瘤的生长和血管新生的影响50-53
- 12. OC-2 基因在卵巢癌发生发展过程中发挥具体作用的机制图53-54
- 第四部分 讨论54-56
- 第五部分 小结与展望56-57
- 1. 小结56
- 2. 展望56-57
- 参考文献57-61
- 中英文缩略词61-62
- 附录62-63
- 硕士期间发表论文情况62
- 硕士期间参加学术活动62-63
- 致谢63
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