胃泌素高表达型大肠癌中microRNAs差异表达的研究

发布时间：2017-10-19 18:24

  本文关键词：胃泌素高表达型大肠癌中microRNAs差异表达的研究

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【摘要】：目的:探讨差异表达的miRNA在胃泌素促进大肠癌细胞中作用机制,并分析在大肠癌治疗中可能存在的临床意义。方法:应用酶联免疫吸附法(ELISA)对各标本中GAS的含量进行检测,得到43例标本中胃泌素的浓度,从中选取胃泌素表达阳性的癌组织、癌旁组织以及胃泌素表达阴性的癌组织、癌旁组织标本各1例,选择丹麦Exiqon公司生产的第六代芯片技术对所选取的的癌组织标本进行miRNA芯片扫描,得到荧光强度图片,再利用扫描仪配套的GenePix pro V6.0荧光信号处理软件对原始数据进行分析运算,将所得结果进行比较,筛选出具有明显差异的miRNA,最后在所得到的表达差异的miRNA中选取明显上调表达和下调表达的miRNA各3例进行实时定量逆转录PCR(real time PCR)验证。结果:本课题组前期利用ELISA法对标本GAS含量测得的结果如下:GAS含量在50.00pg/g以上的9例,200.00pg/g以上的2例,分别为226.10、202.20pg/g;50.00到200.00pg/g之间的有7例,分别为178.85、156.10、122.85、118.70、93.95、76.55、51.65pg/g;其余34例未测得GAS含量。利用miRNA基因芯片对各组标本进行检测,差异表达在3倍以上的miRNA作为纳入标准,其中胃泌素表达阳性的癌组织与癌旁组织比较,上调表达的有349个,下调表达的为108个,胃泌素表达阴性的癌组织与癌旁组织比较,上调表达的有212个,下调表达的为61个。胃泌素表达阳性与阴性的癌组织差异基因中,上调表达的有159个,下调表达的基因有77个,胃泌素表达阳性、阴性的癌组织中差异基因与胃泌素表达阳性、阴性的癌旁组织的差异基因相比较,最终得出的差异miRNA,上调的22个,下调的有12个。从中分别选取明显上调表达和下调表达的miRNA各三个,运用Real-time PCR技术验证。Real-time PCR得到的表达强度通过与内参进行比较和转换,所得到的荧光定量PCR结果与芯片分析结果基本一致。结论:1、胃泌素表达阳性大肠癌中存在差异的miRNAs。2、发现了以前尚未报道过的miRNAs,可能在胃泌素表达阳性的大肠癌中发挥着重要作用。
【关键词】：大肠癌 胃泌素 miRNAs
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.34
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-16
• 内容与方法16-27
• 1.研究内容16-17
• 1.1 总体思路16
• 1.2 技术路线16-17
• 2. 材料与方法17-27
• 2.1 标本来源17-18
• 2.2 主要试剂、药品、实验器材18-20
• 2.3 试验方法和步骤20-27
• 2.3.1 实验准备工作20-21
• 2.3.2 标本采集21
• 2.3.3 总RNA的提取21-22
• 2.3.4 标本RNA的质量控制22-23
• 2.3.5 RNA样本的荧光标记23
• 2.3.6 miRNA芯片杂交23-24
• 2.3.7 miRNA序列扫描及分析24-25
• 2.3.8 实时定量PCR验证25-27
• 结果27-37
• 1.标本情况27
• 2.样本RNA纯度及质量检测27-28
• 3.芯片扫描结果28-35
• 4.数据分析35-36
• 5.实时定量PCR验证结果36-37
• 讨论37-46
• 结论46-47
• 参考文献47-57
• 综述57-74
• 参考文献67-74
• 作者简介及读研期间主要科研成果74-75
• 致谢75-76

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本文编号：1062650