miR-125b在胃癌中的功能机制及其对顺铂化疗敏感性的影响

发布时间：2017-10-19 23:16

  本文关键词：miR-125b在胃癌中的功能机制及其对顺铂化疗敏感性的影响

  更多相关文章： miR-125b 胃癌 化疗敏感性 HER2

【摘要】：背景：胃癌是胃粘膜上皮和腺上皮发生的恶性肿瘤,属消化系统常见肿瘤之一,是一类死亡率极高的恶性肿瘤。目前化疗是胃癌的重要治疗手段,顺铂(DDP)是治疗胃癌最常用的化疗药物之一,但在化疗期间易出现耐药性。因此,寻找一种化疗增敏剂对改善胃癌化疗效果具有非常重要的意义。MicroRNA (miRNA)是一类长度大约为20nt左右的小RNA分子,其通过发挥致癌或抑癌因子的角色,在包括胃癌在内的多种肿瘤的发生发展中均发挥重要作用。已有研究证实，miRNA参与调节肿瘤的化疗耐药过程,为开辟新的化疗增敏剂提供了一个新的思路。本课题组根据胃癌及癌旁正常组织样本的芯片结果,经过系统分析后确定,胃癌组织中存在多个有明显表达差异的]miRNAs,我们从中挑选出下调较明显的miR-125b进一步研究。目的：探讨microRNA-125b (miR-125b)在胃癌中的作用机制及其对化疗药物DDP的影响。方法：收集经术后病理确诊为胃癌的胃癌组织标本和癌旁正常组织标本，采用荧光实时定量PCR法检测miR-125b在胃癌组织和癌旁正常组织中的相对表达情况。在胃癌细胞系中,采用细胞迁移实验、细胞侵袭实验检测miR-125b过表达组和阴性对照(NC)组胃癌细胞迁移、侵袭能力的差异,采用细胞增殖实验检测两组胃癌细胞的增殖能力及其受DDP处理后的增殖能力差异。结果：miR-125b的表达水平在胃癌组织中较癌旁正常组织明显下调。在胃癌细胞系中,过表达组较NC组的细胞迁移、侵袭和增殖能力明显下降,且受DDP处理后的增殖能力也显著下降。在对miR-125b表达量与患者临床指标的相关性分析中发现,miR-125b表达与胃癌的淋巴结转移、HER2表达及患者的总生存期有一定相关性，差异有统计学意义(P0.05)。结论：miR-125b在胃癌的发生发展过程中,发挥了重要的抑癌作用,它抑制了胃癌细胞增殖和转移,并增加胃癌细胞对化疗药物DDP的敏感性。
【关键词】：miR-125b 胃癌 化疗敏感性 HER2
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中英文缩略词表7-8
• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-15
• 材料与方法15-22
• 一、实验材料15-16
• 1、细胞系15
• 2、胃组织标本15
• 3、药品、血清、培养基及添加剂15
• 4、miRNA mimic15
• 5、试剂盒及主要生化试剂15-16
• 6、Taqman探针16
• 7、仪器及设备16
• 8、生物信息学分析软件16
• 二、实验方法16-21
• 1、细胞学实验16-19
• 1.1 细胞的生长条件16-17
• 1.2 细胞复苏17
• 1.3 细胞传代17
• 1.4 细胞冻存17
• 1.5 细胞转染17-18
• 1.6 细胞增殖实验18
• 1.7 细胞迁移实验18
• 1.8 细胞侵袭实验18
• 1.9 DDP处理胃癌细胞18-19
• 2、苏木素-伊红染色(H&E染色)19
• 3、细胞或组织内提取总RNA、逆转录、Taqman stem-loop RT-qPCR19-21
• 3.1 Trizol法提取总RNA19-20
• 3.2 RNA质量的检测20
• 3.3 miRNA逆转录合成cDNA20-21
• 3.4 DNA质量的检测21
• 3.5 Taqman stem-loop RT-PCR21
• 三、统计学分析21-22
• 结果22-35
• 一、miR-125b在胃癌组织中的表达22-23
• 1、miR-125b在胃癌组织中的芯片分析22
• 2、miR-125b在胃癌组织中的差异表达22-23
• 二、miR-125b与临床指标的相关性分析23-27
• 1、miR-125b的表达水平与胃癌患者临床数据的相关性分析24-26
• 2、miR-125b表达与胃癌患者无进展生存时间(PFS)、总生存期(OS)的相关性分析26-27
• 三、miR-125b在胃癌细胞系中的表达27-29
• 1、miR-125b在胃癌细胞系中的差异表达27-28
• 2、检验miR-125b的转染效率28-29
• 四、miR-125b在胃癌细胞系中的功能实验29-32
• 1、过表达miR-125b对细胞增殖的影响30
• 2、过表达miR-125b对细胞迁移的影响30-31
• 3、过表达miR-125b对细胞侵袭的影响31-32
• 五、miR-125b对DDP的化疗增敏作用32-34
• 1、miR-125b起化疗增敏作用时的DDP浓度32-33
• 2、miR-125b对DDP起化疗增敏作用的时间33-34
• 六、miR-125b靶基因的预测与分析34-35
• 1、miR-125b靶基因的预测34
• 2、胃癌组织HER2表达水平与miR-125b表达量的相关性分析34-35
• 讨论35-38
• 结论38-39
• 参考文献39-46
• 文献综述46-58
• 参考文献53-58
• 攻读硕士学位期间发表的文章情况58-59
• 致谢59

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本文编号：1063891