卵泡刺激素受体（FSHR）作为抗肿瘤治疗分子靶标的研究

发布时间：2017-10-22 22:21

  本文关键词：卵泡刺激素受体（FSHR）作为抗肿瘤治疗分子靶标的研究

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【摘要】：【研究背景】卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)是由垂体分泌的性激素,属于G蛋白偶联受体超家族的跨膜糖蛋白,具有促进排卵和精子的生成作用。最近研究发现,FSHR高表达于多种肿瘤新生血管内皮细胞表面,但在肿瘤相近的正常组织和炎症组织中都不表达。这提示FSHR是一种潜在的肿瘤标志物。因此获得抗FSHR的特异抗体具有诊断和治疗价值。骆驼免疫系统中存在一种独特的天然缺失轻链的重链抗体(heavy chain antibodies,HCAb),与常规抗体相比,具有稳定性强,易制备,弱免疫源性等特点,其可变区的特殊结构特征及生化特性赋予其更多的优势,有可能作为新一代抗体药物研发的候选分子。【研究目的】获得抗FSHR骆驼多克隆抗体,采用该抗体对小鼠肿瘤进行抗肿瘤治疗,以探讨FSHR作为抗体药物作用靶标的有效性。【研究方法】IPTG诱导原核表达BL21-p ET-30a-fshr234及亲和层析柱纯化FSHR234重组蛋白,使用重组蛋白对新疆双峰驼进行肌肉免疫。采集少量免疫前后的骆驼外周血样,利用间接ELISA检测抗FSHR抗体的血清效价。当抗体效价达到或超过1:1×104时,从骆驼颈静脉采集300 m L血液,分离抗FSHR抗血清,并通过流式细胞术和Western Blot检测其与抗原的结合活性。免疫组化实验检测小鼠肿瘤中FSHR的表达情况。并培养CT-26肿瘤细胞,建立Balb/C小鼠CT-26移植瘤模型。注射肿瘤第6天时开始抗FSHR多抗对小鼠治疗。将荷瘤小鼠分为PBS(空白组),未免疫骆驼血清(阴性对照组)和骆驼抗FSHR多克隆抗体(实验组)等3组;每组6只小鼠,每只小鼠按20 mg/kg的剂量(即每只小鼠0.4 mg)进行尾静脉注射抗体,观察及检测抗FSHR多克隆抗体对肿瘤生长及侵袭的抑制作用。【研究结果】IPTG诱导原核表达BL21-p ET-30a-fshr234获得0.227 ug/m L FSHR重组蛋白;使用FSHR重组蛋白免疫新疆双峰骆驼获得效价为1:1.3×105的抗FSHR多克隆抗体;Western Blot结果显示骆驼抗FSHR抗血清与FSHR234重组蛋白可以特异结合;流式细胞术检测结果表明抗血清可与PC3细胞表面表达的FSHR特异结合;免疫组化检测结果显示,小鼠CT26肿瘤组织FSHR表达阳性,FSHR在肿瘤组织中及血管表面表达,即说明可以对Balb/C小鼠进行靶向于FSHR的抗体治疗。对荷瘤Balb/C小鼠的抗FSHR多克隆抗体治疗结果显示,抗FSHR多克隆抗体明显抑制小鼠移植瘤的生长。【研究结论】初步研究表明,抗FSHR的抗体对小鼠肿瘤生长具有一定抑制作用,该作用有可能是通过抑制肿瘤新生血管的形成发挥效用,确切机制还有待于进一步研究。
【关键词】：卵泡刺激素受体 多克隆抗体 新疆双峰驼 抗肿瘤治疗
【学位授予单位】：新疆大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R73-36
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一部分 文献综述9-34
• 肿瘤血管生成治疗研究进展9-20
• 文献16-20
• 抗肿瘤抗体靶向治疗研究进展20-34
• 文献30-34
• 第二部分 实验部分34-67
• 第一章 骆驼抗卵泡刺激素受体（FSHR)多克隆抗体的制备及检测34-55
• 摘要34-36
• 1 材料和方法36-38
• 1.1 材料36-37
• 1.1.1 实验器材36
• 1.1.2 实验试剂36-37
• 1.1.3 载体37
• 1.1.4 实验动物37
• 1.2 培养基及溶液配制37-38
• 2 实验方法38-45
• 2.1 FSHR 234重组抗原蛋白的大量原核诱导表达及纯化38-39
• 2.1.1 FSHR 234重组抗原蛋白的大量原核诱导表达38-39
• 2.1.2 FSHR234重组抗原蛋白的纯化39
• 2.2 Western Blot检测FSHR234重组蛋白39-40
• 2.3 Bradford蛋白浓度测定法测定FSHR 234蛋白浓度40
• 2.4 新疆双峰驼的免疫及血样采集40-41
• 2.5 间接ELISA检测抗FSHR多克隆抗体效价41-42
• 2.6 Western Blot检测骆驼抗FSHR多克隆抗体结合活性42
• 2.7 流式细胞检测骆驼抗FSHR多克隆抗体结合活性42-43
• 2.8 小鼠肿瘤组织的石蜡包埋及组织切片的制备43-44
• 2.9 免疫组化检测抗FSHR多克隆抗体结合活性44-45
• 3 实验结果45-51
• 3.1 FSHR234重组蛋白的诱导表达及纯化45-46
• 3.2 Western Blot检测FSHR234蛋白46-47
• 3.3 纯化后重组蛋白FSHR234的浓度测定47
• 3.4 新疆双峰驼的免疫及抗FSHR多克隆抗体效价的检测47-49
• 3.5 Western Blot检测骆驼抗FSHR多克隆抗体结合活性49
• 3.6 流式细胞术检测骆驼抗FSHR多克隆抗体结合活性49-50
• 3.7 免疫组化检测CT-26小鼠移植瘤中FSHR表达情况50-51
• 4 讨论51-52
• 5 参考文献52-55
• 第二章 双峰驼抗FSHR多克隆抗体抗肿瘤靶向治疗作用的初步研究55-67
• 摘要55-56
• 1 实验材料56-58
• 1.1 实验器材56
• 1.2 实验动物56
• 1.3 细胞56
• 1.4 试剂及溶液配制56-58
• 2 实验方法58-61
• 2.1 小鼠结肠癌移植瘤肿瘤模型的建立58-61
• 2.1.1 CT-26细胞的复苏58
• 2.1.2 CT-26细胞的传代培养58-59
• 2.1.3 CT-26细胞的计数59-60
• 2.1.4 CT-26细胞的冻存60
• 2.1.5 CT-26移植瘤肿瘤模型的建立60-61
• 2.1.6 荷瘤Balb/C小鼠的分组61
• 2.1.7 Balb/C小鼠CT-26移植瘤生长情况的观察及抗肿瘤免疫治疗61
• 3 实验结果61-65
• 3.1 CT-26细胞的培养及动物移植瘤模型的建立61-62
• 3.2 对荷瘤Balb/c小鼠的抗体免疫治疗62
• 3.3 抗FSHR多克隆抗体治疗对小鼠移植瘤生长影响的观察62-65
• 4 讨论65
• 5 参考文献65-67
• 结论67
• 展望67-68
• 英文缩略语68-69
• 致谢69-70
• 个人简历70
• 参与课题及发表文章70-71

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 王理伟;周翡;李琦;;肿瘤药物靶向治疗的最新进展[J];肿瘤;2006年04期

2 夏雪琴;木亚沙尔·买买提拉洪;翟田甜;李江伟;;抗卵泡刺激素受体纳米抗体的制备及鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2013年08期

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本文编号：1080360