华蟾素注射液联合PDTC对炎性刺激下A549细胞增殖的抑制效果及其相关作用机制研究

发布时间：2017-10-23 03:28

  本文关键词：华蟾素注射液联合PDTC对炎性刺激下A549细胞增殖的抑制效果及其相关作用机制研究

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【摘要】：目的:本实验旨在研究华蟾素注射液(cinobufacini injection,CI)联合吡咯烷二硫基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbama,PDTC)对炎性刺激下A549细胞的增殖及LPS诱导RAW264.7细胞中炎症因子的抑制效果,并探讨其与NF-κB信号通路的相关作用机制。为华蟾素注射液联合PDTC防治炎症促进肺癌的恶化提供实验依据。方法:1.华蟾素注射液联合PDTC对A549细胞增殖的抑制效果:接种A549细胞孵育贴壁,设对照组,PDTC组,华蟾素注射液组,联合组,加药作用24h、48h后,用CCK-8法检测细胞存活率。2.华蟾素注射液联合PDTC对LPS刺激RAW264.7细胞存活率的影响:接种RAW264.7细胞孵育贴壁,设对照组,LPS刺激组,LPS刺激PDTC组,LPS刺激华蟾素注射液组,LPS刺激联合组,各处理组用脂多糖刺激2h,加药作用24h后,用CCK-8法检测细胞存活率。3.华蟾素注射液联合PDTC对炎症因子的抑制效果:将RAW264.7细胞接种于12孔板,分组加LPS诱导2h,药物孵育24h后,取上清液,用一氧化氮试剂盒检测NO的含量,ELISA试剂盒检测TNF-α、IL-6、IL-1β的含量。4.华蟾素注射液联合PDTC对炎性刺激下A549细胞增殖的抑制效果:接种A549细胞孵育贴壁,设对照组,炎性刺激组,炎性刺激PDTC组,炎性刺激华蟾素注射液组,炎性刺激联合组,并设立非炎性刺激组做对比,炎性刺激组加入LPS刺激RAW264.7细胞上清培养基,药物组分别加入上清培养基或正常培养基配制的药物,孵育48h后,用CCK-8法检测细胞存活率。5.NF-κB p65与细胞核共定位:将RAW264.7细胞接种于cofocal小皿,分组加药处理24h后,在激光共聚焦显微镜下观察nf-κbp65与细胞核定位情况。6.华蟾素注射液联合pdtc抑制iκb-α的降解:将raw264.7细胞接种于6孔板,分组加药孵育24h后,收集细胞,提取蛋白,用westernblot检测iκb-α蛋白的表达。结果:cck-8结果显示,华蟾素注射液及pdtc对a549细胞的增殖均有抑制效果,两者联合使用后,抑制作用更强(p0.05)。lps、华蟾素注射液及pdtc对raw264.7细胞存活率没有影响(p0.05)。消炎效果显示,raw264.7细胞加lps刺激后,各炎症因子的含量明显增加(p0.05),华蟾素注射与pdtc对no、tnf-α、il-6、il-1β均有不同程度的抑制效果,联合使用后,抑制作用总体上高于单药组。在炎性刺激下能促进a549细胞的增殖(p0.05),华蟾素注射液联合pdtc对炎性刺激下a549细胞增殖的抑制效果仍高于单药组(p0.05)。激光共聚焦显微镜结果显示,经lps刺激后,raw264.7细胞中nf-κbp65的核位移明显增多,华蟾素注射液与pdtc均能抑制nf-κbp65的核位移,联合用药后抑制效果更明显。westernblot结果显示,lps能够促进raw264.7细胞中iκb-α的降解(p0.05),经华蟾素注射液与pdtc处理后,iκb-α的降解减少,联合作用后能够提高对iκb-α降解的抑制效果(p0.05)。结论:(1)华蟾素注射液联合pdtc能有效抑制lps诱导raw264.7细胞中no、tnf-α、il-6、il-1β的分泌,其对炎症因子的抑制效果总体上高于单药组。(2)炎性刺激下能促进a549细胞的增殖,华蟾素注射液联合pdtc能有效抑制炎性刺激下及非炎性刺激下a549细胞的增殖,其抑制效果高于单药组。(3)华蟾素注射液联合pdtc抑制炎性刺激下a549细胞增殖的作用机制可能为通过减少lps诱导raw264.7细胞中iκb-α的降解,从而抑制nf-κb的核位移,使nf-κb不能进入细胞核与no、tnf-α、il-6、il-1β相关基因结合并转录,减少了这些炎症因子的分泌,进而降低了炎性刺激对A549细胞增殖的促进作用。
【关键词】：肺癌 华蟾素注射液 PDTC 炎症 NF-κB
【学位授予单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要3-6
• ABSTRACT6-11
• 引言11-13
• 1 实验材料和方法13-23
• 1.1 实验细胞13
• 1.2 药物、试剂、仪器及耗材13-15
• 1.3 试验方法15-22
• 1.4 数据的统计学处理22-23
• 2 结果23-31
• 2.1 PDTC对A549细胞增殖的抑制作用23
• 2.2 华蟾素注射液对A549细胞增殖的抑制作用23-24
• 2.3 华蟾素注射液联合PDTC对A549细胞增殖的抑制作用24-25
• 2.4 华蟾素注射液联合PDTC对LPS刺激RAW264.7 细胞存活率的影响25-26
• 2.5 华蟾素注射液联合PDTC对炎症因子的抑制效果26-27
• 2.6 华蟾素注射液联合PDTC对炎性刺激和非炎性刺激下A549细胞增殖的影响27-28
• 2.7 NF-κB p65与细胞核共定位28-29
• 2.8 华蟾素注射液联合PDTC抑制LPS诱导RAW264.7 细胞中IκB-α 的降解29-31
• 3 讨论和分析31-66
• 3.1 现代医学对肺癌的认识31
• 3.2 肺癌的组织病理学分类31
• 3.3 肺癌的治疗31-36
• 3.4 炎症与肿瘤的关系36-38
• 3.5 炎症因子与肿瘤的关系38-42
• 3.6 NF-κB通路42-48
• 3.7 NF-κB抑制剂48-56
• 3.8 结果分析56-64
• 3.9 存在问题和展望64-66
• 结论66-67
• 参考文献67-82
• 缩略词表82-83
• 综述 NF-κB通路在肺部炎症-肿瘤中的作用及其抑制药物研究进展83-96
• 参考文献91-96
• 致谢96-97
• 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果97

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本文编号：1081421