盐霉素对人宫颈癌Hela细胞体外增殖和凋亡的影响

发布时间：2017-10-25 07:08

  本文关键词：盐霉素对人宫颈癌Hela细胞体外增殖和凋亡的影响

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【摘要】：目的探讨盐霉素是否具有抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡的作用,并从分子水平研究盐霉素对Hela细胞生长可能的调控机制方法(1)将培养后的人宫颈癌Hela细胞以每孔5000个细胞浓度种入双96孔板,培养24小时后,分别随机选取12孔,其中一组为空白对照组,余九组加入盐霉素,浓度分别为0、0.375、1.5、6、12、24、48、96、120μg/m L,其中0μg/m L组为阴性对照组,通过酶标仪测出药物作用24h、48h、72h的OD值,绘制出抑制率与盐霉素浓度和作用时间的关系图;(2)根据上述结果,筛选出细胞接近IC50的盐霉素浓度,分别为6、12、24μg/m L三组,同上法设对照组,将2ml细胞浓度为5×105/ml的细胞接种于6孔板上,培养24h以后,分别向各孔加入浓度为0、6、12、24μg/m L盐霉素,24h后收集细胞,离心固定,PI染色,流式细胞仪测出各组细胞的细胞周期和凋亡率;(3)同上分组法,将10ml细胞浓度为5×106/ml的细胞悬液分别加入到5块培养皿中,培养24h后,分别向各培养皿加入浓度为0、6、12、24μg/m L盐霉素,24h后提取各组细胞总蛋白,Western Blot法检测Bax、Bcl-2、caspase-3基因表达。结果(1)cck-8法检测发现,0.375-120μg/mL的浓度范围内的盐霉素作用Hela细胞24-72h后,细胞增殖抑制率由0.89%上升至96.35%,盐霉素对Hela细胞增殖的抑制作用与盐霉素浓度及作用时间呈正相关关系,差异有统计学意义(P0.05);(2)流式细胞仪检测盐霉素干预24小时后的Hela细胞凋亡情况。发现Hela细胞凋亡率由(11.15±0.70)%上升至(45.1±0.21)%。且凋亡率随浓度增加而呈线性上升,差异具有统计学意义(P0.05)。(3)流式细胞仪检测盐霉素干预24小时后的Hela细胞周期分布情况。发现当盐霉素浓度由6μg/m L升高为24μg/m L时,处于G0/G1期的细胞由(59.56±0.93)%升高至(74.31±0.57)%,且盐霉素浓度越高对G0/G1期的阻滞越明显,差异具有统计学意义(P0.05),处于G2期和S期的变化无明显规律;(4)Western Blot法检测发现,药物组Bcl-2蛋白表达明显低于阴性对照组,且与浓度负相关,差异具有统计学意义(P0.05),Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达明显高于阴性对照组,且与浓度呈正相关,差异具有统计学意义(P0.05)。结论(1)盐霉素对人宫颈癌细胞Hela的体外增殖有较强的抑制效应,且具有良好的浓度依赖性和时间依赖性;(2)盐霉素可诱导Hela细胞凋亡,其机制可能是通过增强bax、caspase-3基因的表达、减少bcl-2基因的表达。
【关键词】：盐霉素 Hela细胞抑制率 Bax Bcl-2 caspase-3
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 主要缩略英文索引9-11
• 前言11-13
• 实验材料13-15
• 实验方法15-21
• 实验结果21-37
• 讨论37-43
• 结论43-45
• 参考文献45-51
• 文献综述: 子宫颈癌的治疗前景51-57
• 参考文献54-57
• 硕士期间发表的论文57-59
• 致谢59

【参考文献】

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1 邹向阳;李连宏;;细胞周期调控与肿瘤[J];国际遗传学杂志;2006年01期

2 ;Expression of Fas ligand and Caspase-3 contributes to formation of immune escape in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2003年07期

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本文编号：1092601