成人T细胞急性淋巴细胞白血病预后分子标记PHF6和DNM2特征研究

发布时间：2017-10-27 08:24

  本文关键词：成人T细胞急性淋巴细胞白血病预后分子标记PHF6和DNM2特征研究

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【摘要】：第一部分PHF6在成人T细胞性急性淋巴细胞白血病中的特征研究目的：T细胞祖细胞在转化过程中出现多种基因的异常改变,这些异常基因协同作用即导致T细胞性急性淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia, T-ALL)的产生。PHF6 (plant homeodomain finger 6)是近期研究发现的关键性肿瘤抑制基因,且在T-ALL疾病中存在突变。本研究目的在于研究成人T-ALL中PHF6基因突变、表达及临床意义。方法：本研究通过对成人T-ALL患者的PHF6基因外显子(exon)2-10进行扩增、克隆和测序,研究PHF6突变的发生率、突变位点和类型。通过实时荧光定量PCR检测T-ALL患者PHF6 mRNA的表达水平。分析PHF6突变及表达异常与NOTCH1突变的相关性及预后意义。统计学分析采用SPSS 20.0软件,白细胞(white blood cell,WBC)、血红蛋白(hemoglobin,Hb)、血小板(platelet, PLT)、乳酸脱氢酶(1actic dehydrogenase, LDH)等计量资料的差异采用非参数Mann-Whitney检验；计数资料采用X2检验(或Fisher精确检验)；Kaplan-Meier检验方法建立生存曲线,并对不同分组进行总生存(overall survival, OS)时间和无事件生存(event-free survival, EFS)时间的生存分析。P0.05认为结果具有统计学意义。结果：本研究成人T-ALL患者中,PHF6基因突变率为27.1%(16/59),其中包括10例新发现的突变,其中6例为框移突变(6/16,37.5%),可导致PHF6功能的丧失。此外,本研究发现在T-ALL患者中PHF6 mRNA表达水平显著降低。重要的是,本研究发现PHF6突变与高龄、血红蛋白浓度降低、CD13阳性表达、脾肿大或淋巴结肿大具有显著相关性。另外,PHF6突变与NOTCH1突变具有显著相关性,同时具有这两种突变的T-ALL患者的EFS时间显著减少。结论：在T-ALL中PHF6基因由于低表达或突变导致失活。PHF6突变可以与NOTCHl突变共存,且具有这两种突变的患者有着更差的预后。在T-ALL患者中,PHF6突变与NOTCH1突变的协同致癌因素可能是一种潜在的预后标志。第二部 DNM2在成人T细胞性急性淋巴细胞白血病中的突变研究目的：NM2 (dynamin2)基因是一种转录因子,参与多种细胞功能,如胞吞,吞噬体形成,细胞内运输,与肌动蛋白和微管网相互作用,以及促进细胞凋亡等。本研究目的在于研究成人T细胞性急性淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)中DNM2基因突变。方法：本研究通过对成人T-ALL患者的DNM2基因外显子(exon)2-10、12-14和16-22进行扩增和测序,研究DNM2突变的发生率、突变位点和类型,分析DNM2突变与NOTCH1和PHF6突变的相关性。统计学分析采用SPSS 20.0软件,白细胞(white blood cell,WBC)、血红蛋白(hemoglobin, Hb)、血小板(platelet, PLT)等计量资料的差异采用非参数Mann-Whitney检验；计数资料采用X2检验(或Fisher精确检验)。P0.05认为结果具有统计学意义。结果：本研究成人T-ALL患者中,DNM2基因突变率为9.52%(4/42),4例突变均为点突变(R361X,Y485H,G537S和R601W),其中2例位于MID域,2例位于PH域。4例DNM2突变患者均存在NOTCH1突变,这4例NOTCH1突变发生于HD-N、HD-C及PEST域：其中3例合并存在PHF6突变,3例PHF6突变发生于exon4、5、8。另外,本研究发现DNM2有同义氨基酸突变,发生于exon4(1/42,2.38%)、exon6(1/42,2.38%)、exon22(1/42,2.38%),特别在exon20有着高发生率(35/42,83.33%),且exon20存在2种同义氨基酸突变(Ala713Ala和Asp720Asp),其中A713A的突变率为73.81%(31/42),并且此突变也发生于B细胞性急性淋巴细胞白血病(B-cell acute lymphoblastic leukemia, B-ALL)及健康人中,突变率均在80%以上。结论：DNM2突变与NOTCH1突变及PHF6突变有着共存现象,可能在T-ALL的发生发展中有着重要作用。
【关键词】：T细胞性急性淋巴细胞白血病 PHF6 NDTCH1 突变 T细胞性急性淋巴细胞白血病 DNM2 NOTCH1 PHF6 突变
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.71
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 第一部分 PHF6在成人T细胞性急性淋巴细胞白血病中的特征研究12-34
• 1 前言12-13
• 2 材料与方法13-19
• 2.1 主要试剂和耗材13
• 2.2 主要仪器和设备13-14
• 2.3 研究对象14
• 2.4 标本采集及单个核细胞的收集14-15
• 2.5 细胞总DNA的提取15-16
• 2.6 细胞总RNA的提取和cDNA的制备16-17
• 2.7 免疫表型及细胞遗传学检测17
• 2.8 基因组PCR及测序17-18
• 2.9 实时荧光定量PCR18-19
• 2.10 统计学分析19
• 3 结果19-29
• 3.1 PHF6在T-ALL中的突变特征19-22
• 3.2 PHF6基因在T-ALL患者中的表达及与突变的关联22-23
• 3.3 PHF6突变与临床指标的相关性23-25
• 3.4 PHF6突变与其它基因突变在T-ALL中的关联性25
• 3.5 PHF6突变与NOTCH1突变共表达与临床指标的相关性25-28
• 3.6 PHF6突变与临床预后的相关性28-29
• 4 讨论29-31
• 5 参考文献31-34
• 第二部分 DNM2在成人T细胞性急性淋巴细胞白血病中的突变研究34-53
• 1 前言34-35
• 2 材料与方法35-41
• 2.1 主要试剂和耗材35
• 2.2 主要仪器和设备35-36
• 2.3 研究对象36
• 2.4 标本采集及单个核细胞的收集36-37
• 2.5 细胞总DNA的提取37-38
• 2.6 免疫表型及细胞遗传学检测38
• 2.7 基因组PCR及测序38-40
• 2.8 统计学分析40-41
• 3 结果41-48
• 3.1 DNM2在T-ALL中的突变特征41-43
• 3.2 DNM2基因同义氨基酸突变43-45
• 3.3 DNM2突变合并存在NOTCH1、PHF6突变45
• 3.4 DNM2突变与临床指标的相关性45-48
• 4 讨论48-50
• 5 参考文献50-53
• 综述53-68
• 参考文献59-68
• 附录68-70
• 在读期间发表的论文70-71
• 致谢71

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1 李敏;成人T细胞急性淋巴细胞白血病预后分子标记PHF6和DNM2特征研究[D];南京医科大学;2016年

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本文编号：1102701