AMPK在胃癌中对Bmi-1的抑制作用

发布时间：2017-10-28 01:12

  本文关键词：AMPK在胃癌中对Bmi-1的抑制作用

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【摘要】：背景和目的:5’单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)一直以来被称为细胞内的“能量感受器与调节器”,AMPK的抑癌功能已经得到研究者们的广泛认可。AMPK可通过一系列信号通路影响细胞的增殖、侵袭和迁移从而发挥其抑癌功能。Bmi-1属于多疏基因家族成员,不仅能维持肿瘤干细胞的自我更新,还在EMT进程中发挥着极为重要的作用。我们在肺癌的前期试验表明:1.AMPK活性升高,Bmi-1表达下降;而降低AMPK活性后,Bmi-1的表达反而升高,即AMPK能够抑制Bmi-1的表达。2.LITAF为AMPK下游,受AMPK正调控,且我们的microarray分析结果显示LITAF可以调控部分mi RNA,而其中的mi RNA-15a/128/194可调控Bmi-1的表达。所以我们猜想AMPK是否能通过LITAF抑制Bmi-1的表达。因此,本研究旨在探究胃癌中Bmi-1的表达是否受AMPK抑制,并探索AMPK影响Bmi-1表达的分子机制。为进一步研究AMPK的抑癌功能提供实验依据。方法:1收集66例胃癌及相应癌旁组织蜡块,组织切片后采用免疫组化方法检测p-AMPK、Bmi-1在胃癌及相应癌旁组织标本中的表达情况,并分析两者之间的相关性。2收集16例胃腺癌及相应癌旁新鲜组织,提取蛋白后采用Western blotting方法检测p-AMPK、Bmi-1在胃癌及其癌旁新鲜组织标本中的表达情况。3用AMPK激活剂黄连素、二甲双胍和AMPK抑制剂Compound C分别处理胃癌细胞SGC-7901和AGS后,观察AMPK的活性变化情况、以及LITAF和Bmi-1蛋白的表达变化。4转染AMPK-DN质粒至AGS细胞抑制AMPK的活性,观察Bmi-1表达的变化。5制备含p Super Retro-LITAF-sh RNA和p Super Retro-LITAF-sh RNA-Control重组逆转录病毒质粒,感染胃癌细胞AGS敲除LITAF基因,puromycin筛选获得AGS-LITAF-sh RNA和AGS-sh RNA-C稳定细胞株。采用Western Blotting及q RT-PCR两种方法验证LITAF缺失细胞株是否构建成功,并检测Bmi-1蛋白的表达。结果:1在胃癌组织中Bmi-1的表达明显高于相应的癌旁组织(P0.01),而p-AMPK在胃癌组织中的表达则显著低于相应的癌旁组织(P0.01)。2 Berberine处理SGC-7901和AGS细胞后,AMPK活性升高,p-ACC表达增加,而Bmi-1蛋白的表达降低。相反,用AMPK抑制剂Compound C抑制了AMPK活性并增加了Bmi-1的表达。提示AMPK可能调节Bmi-1的表达。3转染AMPK-DN质粒至AGS细胞中,AMPK下游因子活性下降,但Bmi-1表达增加。通过以上研究我们可以确定AMPK能够抑制Bmi-1的表达。4 Metformin能够增加AMPK活性,增加LITAF的表达,并减少Bmi-1的表达。5与AGS-sh RNA-C细胞克隆株相比,AGS-LITAF-sh RNA单克隆细胞株中LITAF蛋白表达量明显减少,而Bmi-1的表达显著增高。结果表明LITAF能够调节Bmi-1的表达。因此,AMPK能够通过AMPK-LITAF-Bmi-1信号轴发挥对Bmi-1的抑制作用。结论:在胃癌细胞中,AMPK能抑制Bmi-1蛋白的表达,这种抑制作用是通过上调LITAF的表达发挥的。
【关键词】：AMPK Bmi-1 LITAF 胃癌
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-8
• 中英文缩略词表8-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料与方法13-31
• 2.1 材料13-17
• 2.1.1 实验材料13-14
• 2.1.2 主要实验试剂14-16
• 2.1.3 主要实验仪器16-17
• 2.2 研究方法及内容17-30
• 2.2.1 主要实验试剂配置方法17-19
• 2.2.2 实验方法19-30
• 2.3 统计分析30-31
• 第3章 实验结果31-41
• 3.1 胃癌及癌旁组织中p-AMPK与Bmi-1 的表达31-33
• 3.2 AMPK活性上升对Bmi-1 表达的影响33-35
• 3.3 AMPK活性下降对Bmi-1 表达的影响35-38
• 3.3.1 Compound C抑制AMPK活性后对Bmi-1 表达的影响35-37
• 3.3.2 转染AMPK-DN质粒后对Bmi-1 表达的影响37-38
• 3.4 AMPK抑制Bmi-1 的机制38-41
• 第4章 讨论41-45
• 4.1 AMPK与Bmi-1 关系的初步探究41
• 4.2 AMPK对Bmi-1 的抑制作用41-43
• 4.3 AMPK抑制Bmi-1 表达的作用机制43-45
• 第5章 结论45-46
• 致谢46-47
• 参考文献47-50
• 攻读学位期间的科研成果50-51
• 综述51-63
• 参考文献59-63

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