一种新型噻唑烷化合物诱导A549细胞凋亡及其作用机制研究

发布时间：2017-10-28 06:13

  本文关键词：一种新型噻唑烷化合物诱导A549细胞凋亡及其作用机制研究

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【摘要】：研究背景及目的:肺癌是威胁人类健康的恶性肿瘤之一,因肺癌而死亡的癌症患者每年都有所上升。目前,肺癌的治疗手段主要是化疗,大多化疗药物有较大的毒副作用,且在治疗后期容易引起耐药。因此,寻找一种新型的肺癌化疗药物十分关键。近年来的研究发现,噻唑烷化合物能够诱导肿瘤细胞的凋亡,在癌症的治疗方面已有一定的应用。鉴于噻唑烷化合物的抗肿瘤活性,本研究选择一种新型的噻唑烷化合物YFZ-38,研究其对人肺腺癌A549细胞的作用机制,以期为肺癌的治疗提供一定的理论依据。研究方法:建立裸鼠肺癌的移植瘤模型,观察新型噻唑烷化合物YFZ-38对体内肿瘤的抑制作用;以不同浓度的YFZ-38作用于体外培养的A549细胞,并用XTT法检测细胞的存活率,分析其对A549细胞的抑制作用;采用倒置相差显微镜和荧光显微镜下观察YFZ-38诱导的细胞凋亡的形态学变化,ELISA法检测YFZ-38诱导的凋亡率,分析新型噻唑烷化合物YFZ-38对A549细胞的凋亡诱导作用;Caspase酶活检测和ELISA法检测YFZ-38对细胞凋亡的影响,Fas、mFasL和sFasL的检测以及ZB4作用下细胞存活率的检测等,分析YFZ-38诱导A549细胞的凋亡途径。研究结果:新型噻唑烷化合物YFZ-38能抑制裸鼠皮下肿瘤的生长,且表现出时间与剂量依赖性;XTT实验结果显示YFZ-38能抑制A549细胞增殖且有一定的剂量依赖性,而对正常的细胞毒性较小;细胞凋亡检测结果显示2.8μM/L的YFZ-38处理A549细胞48h可观察到细胞凋亡的形态学变化;ELISA法检测结果显示2.8μM/L和5.6μM/L的YFZ-38处理A549细胞能使核小体水平显著增加,即能够诱导A549细胞的凋亡,有一定的时间和剂量依赖性;对凋亡机制的研究表明YFZ-38能诱导A549细胞的凋亡,凋亡的途径可能与线粒体、内质网及Fas有关。结论:1.YFZ-38能够抑制体内外A549细胞的增殖;2.YFZ-38能够诱导A549细胞的凋亡;3.YFZ-38诱导A549细胞凋亡的途径可能与线粒体、内质网及Fas有关。
【关键词】：噻唑烷化合物 YFZ-38 A549细胞 细胞凋亡 Caspase酶
【学位授予单位】：曲阜师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 第一部分 前言8-14
• 1.1 研究背景8-13
• 1.1.1 肺癌概述8
• 1.1.2 噻唑烷化合物研究进展8-9
• 1.1.3 细胞周期9-11
• 1.1.3.1 概述9
• 1.1.3.2 细胞周期检验点9-10
• 1.1.3.3 细胞周期调控与肿瘤10-11
• 1.1.4 细胞凋亡11-13
• 1.1.4.1 概述11-12
• 1.1.4.2 细胞凋亡的信号通路12-13
• 1.2 实验目的及意义13-14
• 第二部分 实验操作14-29
• 2.1 实验材料14-20
• 2.1.1 细胞系14
• 2.1.2 抗肿瘤药物14
• 2.1.3 主要试剂14
• 2.1.4 主要仪器14-15
• 2.1.5 主要溶液及试剂配方15-20
• 2.1.5.1 细胞培养所用试剂15-17
• 2.1.5.2 细胞存活率检测试剂17-18
• 2.1.5.3 细胞凋亡检测所用试剂18-20
• 2.1.5.4 细胞内Fas/FasL蛋白检测所用试剂20
• 2.2 实验方法20-28
• 2.2.1 YFZ-38的体内抑瘤实验20
• 2.2.2 A549细胞的传代20-21
• 2.2.3 A549细胞的冻存21
• 2.2.4 A549细胞的复苏及培养21-22
• 2.2.5 XTT法检测细胞存活率22
• 2.2.6 倒置相差显微镜下观察细胞形态22-23
• 2.2.7 苏木精-伊红实验检测观察形态学变化23-24
• 2.2.8 吉姆萨染色实验24-25
• 2.2.9 荧光显微镜观察细胞核片段化25
• 2.2.10 Nucleosome ELISA检测核小体水平25-26
• 2.2.11 Caspase试剂盒检测酶活性26
• 2.2.12 细胞凋亡的ELISA检测26-27
• 2.2.13 Fas、mFasL、sFasL的ELISA检测27
• 2.2.14 Fas抑制剂ZB4作用下细胞存活率及其凋亡率的检测27-28
• 2.3 数据处理28-29
• 第三部分 实验结果与讨论29-42
• 3.1 实验结果29-39
• 3.1.1 YFZ-38对体内肿瘤生长的抑制作用29
• 3.1.2 XTT实验检测细胞存活率29
• 3.1.3 倒置相差显微镜下细胞形态观察29
• 3.1.4 HE染色检测细胞形态学变化29
• 3.1.5 吉姆萨染色实验检测细胞凋亡形态29-30
• 3.1.6 荧光显微镜观察细胞核片段化30
• 3.1.7 Nucleosome ELISA检测核小体水平30
• 3.1.8 Caspase试剂盒检测酶活性30
• 3.1.9 ELISA法检测caspase酶抑制剂对YFZ-38诱导A549细胞凋亡的影响30
• 3.1.10 Fas、mFasL、sFasL的检测30-31
• 3.1.11 Fas抑制剂ZB4作用下细胞存活率及其凋亡率的检测31-39
• 3.2 讨论39-42
• 3.2.1 YFZ-38能抑制体内外A549细胞的增殖39
• 3.2.2 YFZ-38诱导A549细胞的凋亡39-40
• 3.2.3 YFZ-38诱导A549细胞凋亡机制的初步研究40-42
• 第四部分 结论与展望42-43
• 4.1 实验结论42
• 4.2 展望42-43
• 附录43-44
• 参考文献44-48
• 致谢48

【参考文献】

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1 赵旭,宋宇彤,李福才;中心体异常相关基因的肿瘤学研究进展[J];中国肿瘤;2003年07期

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本文编号：1106979