Plk1分子信号通路在类肿瘤干细胞静息调控中的特征分析

发布时间：2017-10-29 21:30

  本文关键词：Plk1分子信号通路在类肿瘤干细胞静息调控中的特征分析

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【摘要】：卤虫是一种生活在高山盐湖、海洋高盐等极端环境的小型甲壳动物,它在地球上出现已有4亿年之久,在漫长的进化过程中,它的形态、生理和生化方面几乎没有任何改变,但为了适应恶劣的环境,卤虫形成了两套生殖及胚胎发育体系：即在环境适宜的条件下,卤虫主要是以卵胎生模式繁殖；当条件不适宜时,卤虫则会产生由密致几丁质壳包被的休眠卵,这种休眠卵的细胞周期处于静息状态(GO期),休眠卵经过冷冻激活后,当遇到适宜的环境条件时,细胞静息被打破重新启动细胞分裂,进入胚胎发育并孵化出幼体。卤虫细胞周期的静息与打破为研究细胞静息与增值调控提供了适宜的材料。先前的研究表明,P1k1与RSK1信号通路与卤虫休眠胚胎的形成有关,并且在卤虫休眠卵中,P1k1和RSK1的活性都是被抑制的。为了进一步研究Plk1、RSK1信号通路与细胞的静息和打破静息的关系,在卤虫的孵化过程中,用NM(去乙酰化酶抑制剂)处理,人为的使细胞周期处于静息状态,之后撤去NM,细胞静息被打破,在这个过程中,检测了Plk1、MEK-ERK-RSK1信号通路分子的表达特征。实验结果表明,在用NM处理细胞静息时,Plk1、MEK表达量很低,而去掉NM后,Plk1、MEK的表达量又开始上升。这说明P1k1和RSK1信号通路参与了卤虫细胞的静息与打破静息的调节。在类肿瘤干细胞中进一步研究了P1k1和RSK1这条信号通路在细胞静息调控中的作用,首先在胃癌细胞系MKN45中分选得到了类肿瘤干细胞,并通过PKH26标记找到了静息的类肿瘤干细胞。通过研究静息类肿瘤干细胞中P1k1,MEK-ERK-RSK1信号通路分子的表达特征,发现与处于旺盛有丝分裂的肿瘤细胞相比,在静息的类肿瘤干细胞中P1k1,以及RSK1信号通路分子的表达量受到了明显的抑制,这表明P1k1和RSK1信号通路参与了类肿瘤干细胞静息的调控。在类肿瘤干细胞中,使用P1k1的抑制剂处理,结果表明处理组的细胞生长停滞,类肿瘤干细胞无法成球,同时发现RSK1信号通路受到了明显的抑制。而用RSK1抑制剂处理抑制RSK1蛋白水平时,P1k1的活性增强,这说明RSK1可以反馈的促进P1k1的表达,P1k1作为MEK-ERK-RSK1信号通路的上游调节类肿瘤干细胞的增殖。癌症是现在人类面临最多的疾病之一。传统的放疗,化疗,手术切除等方式并不能完全治愈癌症,研究表明,在实体瘤中存在静息的类肿瘤干细胞,这种细胞可以抵抗放疗、化疗等。所以以卤虫为研究模型动物,研究细胞的静息机制对于肿瘤的科学研究提供了很多新的思路和方法。
【关键词】：卤虫 类肿瘤干细胞 细胞静息 Plk1 RSK1
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R73-3
【目录】：

• 致谢6-8
• 摘要8-10
• Abstract10-13
• 缩略词13-17
• 第1章 绪论17-27
• 1.1 研究背景17-26
• 1.1.1 卤虫概况17
• 1.1.2 卤虫休眠胚胎的发育过程17-18
• 1.1.3 Plk1激酶18-20
• 1.1.4 RSK1激酶20-21
• 1.1.5 肿瘤干细胞概述21-23
• 1.1.6 肿瘤干细胞的静息23-26
• 1.2 研究目的、方法和意义26-27
• 第2章 Plk1,RSK1信号通路分子在卤虫细胞静息与打破过程中的表达特征27-36
• 2.1 引言27-28
• 2.2 材料与仪器28
• 2.2.1 实验材料28
• 2.2.2 实验试剂28
• 2.2.3 主要仪器28
• 2.3 实验方法28-32
• 2.3.1 去乙酰化酶抑制剂(NM)侵泡与移除28-29
• 2.3.2 总蛋白的提取29
• 2.3.3 Western blotting29-32
• 2.4 实验结果32-34
• 2.4.1 卤虫孵化过程中的NM处理32-33
• 2.4.2 卤虫孵化NM处理与撤去过程中,Plk1和RSK1信号通路分子表达特征33-34
• 2.5 小结与讨论34-36
• 第3章 类肿瘤干细胞的筛选及干性鉴定36-47
• 3.1 引言36-37
• 3.2 材料37
• 3.2.1 实验材料37
• 3.2.2 主要试剂37
• 3.2.3 主要仪器37
• 3.3 实验方法37-41
• 3.3.1 胃癌干细胞的分选37-38
• 3.3.2 类肿瘤干细胞的的再次筛选38-39
• 3.3.3 细胞培养39-40
• 3.3.4 细胞免疫荧光40-41
• 3.4 实验结果41-45
• 3.4.1 类肿瘤干细胞的流式分选41-45
• 3.5 小结与讨论45-47
• 第4章 类肿瘤干细胞静息的鉴定47-55
• 4.1 引言47-48
• 4.2 材料48-49
• 4.2.1 实验材料48
• 4.2.2 主要试剂48-49
• 4.2.3 主要仪器49
• 4.3 实验方法49
• 4.3.1 PKH26染色方法49
• 4.3.2 细胞免疫荧光49
• 4.4 结果49-54
• 4.4.1 胃癌干细胞静息的标记49-51
• 4.4.2 静息类肿瘤干细胞的鉴定51-54
• 4.5 小结与讨论54-55
• 第5章 Plk1,RSK1信号通路分子在静息类肿瘤干细胞中的表达特征以及Plk1与RSK1信号通路的相互作用55-65
• 5.1 引言55-56
• 5.2 材料56-57
• 5.2.1 实验材料56
• 5.2.2 主要试剂56-57
• 5.2.3 主要仪器57
• 5.3 实验方法57
• 5.3.1 细胞的传代与培养57
• 5.3.2 抑制剂的使用57
• 5.3.3 Western blotting57
• 5.4 实验结果57-63
• 5.4.1 静息类肿瘤干细胞中,Plk1和RSK1信号通路蛋白的表达特征57-60
• 5.4.2 Plk1抑制剂处理对于细胞分裂的影响60
• 5.4.3 Plk1抑制剂处理对RSK1信号通路的影响60-61
• 5.4.4 RSK1抑制剂对于Plk1的影响61-62
• 5.4.5 Plk1抑制剂和RSK1抑制剂共处理对于细胞分裂的影响62-63
• 5.5 小结与讨论63-65
• 结论与展望65-66
• 1 结论65
• 2 展望65-66
• REFERENCES66-75
• 附录一 常用试剂配制一览表75-77
• 附录二 作者简历77

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