miR-21在胰腺癌中的生物学功能及肿瘤血管生成的研究

发布时间：2017-11-01 03:07

  本文关键词：miR-21在胰腺癌中的生物学功能及肿瘤血管生成的研究

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【摘要】：目的胰腺癌的早期发现极其困难,其恶性度极高、医治成效及预后也极差。miR-21是微小RNA中的重要成员之一,其发挥生物学作用是通过调节多种基因的表达来实现的;miR-21在胰腺癌的组织标本中亦具有相对较高的表达水平,但其如何调节和控制肿瘤的产生发展,以及具体的分子机制还没有完整的阐释清楚。本课题着重研究miR-21对胰腺癌细胞生物学功能的影响及通过HGF/c-MET信号通路调节胰腺癌肿瘤血管生成的有关分子机制,为胰腺癌治疗提供新的理论依据。方法首先培养所选取的胰腺癌细胞系PANC-1、MiaPaca-2、CFPAC-1、BxPc-3,转染miR-21mimic,MTT方法检测胰腺癌细胞的活性;用生长曲线及平板克隆实验、细胞划痕实验,Transwell等检测手段,评估分析mi R-21对胰腺癌细胞的生物学行为产生的影响;选用PCR技术测定胰腺癌细胞系中miR-21的相对表达水平;随后分别用miR-21抑制剂(AC1MMYR2)和miR-21拟似物(miR-21 mimic)处理细胞,应用PCR技术检测各组的miR-21、VHL、cMET的相对表达水平;应用Western印迹检测miR-21表达发生改变后一些相关分子的变化及对相关信号通路下游蛋白所产生的影响;ELISA检测HGF的生成情况,并通过血管生成实验,进一步分析miR-21表达水平改变后对胰腺癌血管生成可能产生的影响。结果mi R-21的表达水平在胰腺癌细胞系中是相对高表达的;结果显示,PANC-1细胞中miR-21的表达水平约为MiaPaca-2的4倍;CFPAC-1细胞中miR-21的表达水平相对最高,约为MiaPaca-2的5~6倍;BxPc-3细胞约为1.2倍;转染miR-21mimic后,MiaPaca-2细胞miR-21的表达水平升高最明显,升高水平约在25~28倍。将胰腺癌细胞MiaPaca-2中的miR-21表达水平升高后,发现胰腺癌细胞具有更强的生长和增殖能力,其相应的侵袭和迁移能力亦得到了加强。PCR证实,用miR-21抑制剂(AC1MMYR2)作用于CFPAC-1细胞,可使mi R-21的表达水平降低,VHL表达水平相对升高,c-MET表达水平相对降低;miR-21拟似物(miR-21 mimic)作用于MiaPaca-2细胞,mi R-21表达水平升高,VHL表达水平下降,c-MET表达水平未见明显升高。Western印迹发现降低mi R-21的表达能够使VHL表达相对升高,同时下调HGF、c-MET、AKT等相关蛋白的表达;升高mi R-21的表达水平,可抑制VHL的表达,上调HGF、c-MET、AKT等相关蛋白的表达;运用ELISA检测手段发现,表达升高的miR-21可使细胞培养液中HGF的浓度有所升高;血管生成实验发现,降低miR-21的表达视野中所形成的血管数目低于对照组;升高miR-21的表达,视野中所形成的血管数目高于对照组。结论胰腺癌细胞系中的miR-21具有促癌作用,可提升胰腺癌细胞的活性,使其具有更强的生长和增殖能力,并同时加强侵袭和迁移的能力;在胰腺癌细胞中,mi R-21可能通过HGF/c-MET信号通路发挥促进胰腺癌血管生成的作用。本研究初步探讨了miR-21对胰腺癌恶性表型的影响及在胰腺癌血管生成中的作用,为胰腺癌的治疗提供一种新的思路。
【关键词】：微小RNA miR-21 HGF/c-MET 胰腺癌 恶性表型 肿瘤血管生成
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.9
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-12
• 前言12-17
• 研究现状、成果12-15
• 研究目的、方法15-17
• 一、miR-21在胰腺癌细胞中的生物学功能研究17-33
• 1.1 材料和方法17-23
• 1.1.1 实验材料17-19
• 1.1.2 实验方法19-23
• 1.2 结果23-30
• 1.2.1 胰腺癌细胞系传代培养成功23-24
• 1.2.2 细胞总RNA的抽提结果24
• 1.2.3 未作处理的胰腺癌细胞系miR-21相对表达水平24-25
• 1.2.4 miR-21mimic转染胰腺癌细胞后miR-21的相对表达水平25-26
• 1.2.5 升高miR-21表达可以提高MiaPaca-2 细胞的活性26
• 1.2.6 升高miR-21表达促进MiaPaca-2 细胞的生长及增殖能力26-27
• 1.2.7 miR-21表达水平升高后，，增强MiaPaca-2 的迁移侵袭力27-30
• 1.3 讨论30-32
• 1.4 小结32-33
• 二、miR-21对胰腺癌肿瘤血管生成的研究33-48
• 2.1 材料与方法33-40
• 2.1.1 实验材料33-34
• 2.1.2 实验方法34-40
• 2.2 结果40-45
• 2.2.1 miR-21抑制剂（AC1MMYR2）作用于胰腺癌细胞的结果40-41
• 2.2.2 miR-21 mimic作用于胰腺癌细胞的结果41-42
• 2.2.3 miR-21的表达水平对细胞培养液中HGF含量的影响42-43
• 2.2.4 血管形成实验结果43-45
• 2.3 讨论45-47
• 2.4 小结47-48
• 结论48-49
• 参考文献49-53
• 发表论文和参加科研情况说明53-54
• 综述 microRNAs在胰腺癌中的重要作用54-70
• 综述参考文献62-70
• 致谢70

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6 ;胰腺肿瘤[J];国外科技资料目录.医药卫生;2001年02期

7 ;胰腺肿瘤[J];国外科技资料目录(医药卫生);2002年01期

8 邓晓春,莫云凌;胰腺癌临床研究进展[J];肿瘤学杂志;2002年03期

9 吕自来,孙清慧,于德国;胰腺癌10例误诊原因分析[J];临床医药实践;2003年05期

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5 保健时报记者 王朝建 通讯员 王懿辉;中年突发糖尿病当心胰腺癌[N];保健时报;2012年

6 上海市肿瘤医院胰腺肝胆外科主任医师 虞先o

本文编号：1124949