二甲双胍上调TIP30表达抑制低剂量索拉非尼的促肝癌转移作用

发布时间：2017-11-01 17:04

  本文关键词：二甲双胍上调TIP30表达抑制低剂量索拉非尼的促肝癌转移作用

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【摘要】：目的:低剂量的索拉非尼可以抑制肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的生长,但可促进其转移的发生。本研究目的为明确二甲双胍能否增强低剂量索拉非尼治疗肝细胞肝癌的疗效并逆转其促转移的效果,并探讨其相关的分子作用机制。内容:研究二甲双胍和低剂量索拉非尼两种药物联合应用,对于治疗肝癌细胞系MHCC97H建立的裸鼠原位瘤模型的疗效,观察肿块大小、肺转移情况以及荷瘤裸鼠的生存期;利用肝癌细胞系进行相关的细胞学实验,检测二甲双胍、索拉非尼以及两者联合应用后相关蛋白的变化以及细胞的增殖与侵袭能力的变化,进一步研究可能的分子作用机制。方法:1)在裸鼠皮下种植肝癌细胞MHCC97H使其成瘤,四周后,将皮下瘤块剪成约1mm3的小肿块,而后原位接种到裸鼠的肝脏上,建立裸鼠原位瘤模型。每天分别给予二甲双胍(200 mg/kg)、索拉非尼(30 mg/kg)以及或二者联合使用进行灌胃治疗,治疗4周后观察裸鼠原位瘤大小、肺转移的情况以及荷瘤裸鼠的生存期。2)进行肝癌细胞系MHCC97H体外实验研究,应用Western blotting、Transwell以及CCK-8等实验技术,观察二甲双胍(5 m M或者10m M)、索拉非尼(5mM)以及两者联合应用后肝癌细胞系MHCC97H中TIP30、p-AMPK以及TXN(Thioredoxin)蛋白的表达情况,同时检测细胞的增殖及侵袭能力变化,以便进一步探讨相关的分子作用机制。结果:1)体内实验表明,索拉非尼和二甲双胍联合治疗可以延长肝脏原位荷瘤裸鼠的中位生存期,减小原位肿瘤的体积并且减少肿瘤肺转移。2)在体外实验中,联合应用索拉非尼和二甲双胍处理肝癌细胞系MHCC97H后发现,二甲双胍可通过激活AMPK通路来增加肝癌细胞中TIP30蛋白的表达,索拉非尼抑制TIP30蛋白的表达,而联合用药后,肝癌细胞中TIP30蛋白的表达量显著恢复。肿瘤转移正相关的TXN的蛋白表达量在联合用药后显著降低,且受到TIP30负性调控。索拉非尼和二甲双胍联合应用后肝癌细胞MHCC97H的增殖能力与侵袭能力均受到了明显抑制。结论:二甲双胍可以增强低剂量索拉非尼治疗肝细胞癌的疗效并逆转其促转移的效果,其主要的作用机制可能是通过激活AMPK通路来上调TIP30蛋白的表达,进而负性调控TXN的表达来抑制肿瘤的生长能力与转移能力。
【关键词】：肝细胞肝癌 二甲双胍 索拉非尼 TIP30 硫氧还蛋白
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-13
• 研究现状、成果11
• 研究目的、方法11-13
• 对象和方法13-31
• 1.1 实验材料13-16
• 1.1.1 细胞系13
• 1.1.2 实验动物13
• 1.1.3 主要实验试剂13-15
• 1.1.4 实验试剂盒15
• 1.1.5 主要仪器设备15-16
• 1.1.6 主要实验分析作图软件16
• 1.2 实验方法16-31
• 1.2.1 主要实验试剂和溶液的配制16-19
• 1.2.2 细胞复苏19
• 1.2.3 细胞传代19-20
• 1.2.4 细胞冻存20
• 1.2.5 细胞计数20
• 1.2.6 利用脂质体Lipofectamine 2000进行细胞转染20-21
• 1.2.7 细胞蛋白的提取21-22
• 1.2.8 组织蛋白的提取22
• 1.2.9 蛋白浓度测定22-23
• 1.2.10 聚丙烯酰胺凝胶电泳23-24
• 1.2.11 湿转法转膜24-25
• 1.2.12 PVDF膜的封闭、抗体孵育及曝光25-26
• 1.2.13 Transwell侵袭实验26-28
• 1.2.14 动物模型建立与处理方式28-29
• 1.2.15 统计学分析29
• 1.2.16 伦理认证29-31
• 结果31-39
• 2.1 索拉非尼和二甲双胍联合应用可以延长原位荷瘤裸鼠的中位生存期,减小原位肿瘤的体积和减弱肺转移能力31-33
• 2.2 二甲双胍通过激活AMPK途径增加TIP30的表达33-34
• 2.3 索拉非尼联合二甲双胍通过提高MHCC97H细胞系中TIP30蛋白的表达，，进而抑制其增殖与侵袭能力34-36
• 2.4 TXN在肿瘤转移过程中起到重要作用，同时受到TIP30的负性调控36-39
• 讨论39-41
• 结论41-42
• 参考文献42-46
• 发表论文和参加科研情况说明46-47
• 综述 索拉非尼与二甲双胍在肿瘤防治中的作用47-63
• 综述参考文献54-63
• 致谢63-65
• 个人简历65

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本文编号：1127706