β-arrestin2在Toll-like receptor 9激动剂诱导的人A549细胞炎症反应中作用的基础研究

发布时间：2017-11-02 18:13

  本文关键词：β-arrestin2在Toll-like receptor 9激动剂诱导的人A549细胞炎症反应中作用的基础研究

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【摘要】：研究背景和研究目的肺癌已经是公认的最常见的恶性肿瘤之一,并且已成为我国甚至是世界人口恶性肿瘤死亡原因的首位。在肺癌中,大约有85%的患者被诊断为非小细胞肺癌,而在这些非小细胞患者中,他们的5年存活率一般低于15%。β-arrestin2是视觉抑制蛋白,它在各种疾病中的作用已经得到广泛的研究,近几年来,人们发现β-arrestin2在肿瘤的发生过程中可能起到重要的作用。β-arrestin2能够通过GPCR的激活引发下游MAPK信号通路的激活,许多的研究表明MAPK信号通路与细胞的凋亡以及炎症有关。炎症反应是有机体免疫过程中的一个基本的保护措施。越来越多的证据表明炎症反应是一个重要的起始因子,它能够诱导许多其他的疾病。在很多情况下,慢性炎症能够促进肿瘤的发生,主要是通过促进血管生成、促进细胞的增殖或者转移来实现的。越来越多的研究表明,在调节肿瘤的发生和形成过程中,免疫系统起着重要的作用,在这个过程中,先天免疫和后天免疫中的一些成分均有参加。一些成分能够通过免疫监视作用使肿瘤细胞死亡从而最终抑制肿瘤细胞的生长,然而,其他的有些成分则能够促进肿瘤的生长。TLR是先天免疫系统中的一个重要组成成分,并且对于识别PAMP和DAMP具有重要作用。人们已经知道,细菌或者细菌的提取物能够与未甲基化的CG序列结合从而起到抗肿瘤的作用,并且这对于免疫系统也有着比较强的作用。另外,有研究表明,TLR9似乎在一些肿瘤的发生中起着重要的作用。并且有研究表明TLR-9在非小细胞肺癌组织中的表达量很高,然而另一些研究表明在非小细胞肺癌患者的血清中β-arrestin2的含量与正常人相比偏低,说明TLR-9和β-arrestin2都能够影响非小细胞肺癌的形成。那么这二者之间又有着什么联系呢?因为本文主要想从这个切入点开展研究。本文主要是想研究β-arrestin2在TLR-9介导的炎症反应中是否起作用,并且是如何起作用的。研究结果1.TLR-9激动剂ODN2216能够促进A549细胞的生长本论文中,首先检测了TLR-9激动剂ODN2216对A549细胞存活率的影响。加药处理后,用SRB染色法检测细胞的存活率,可以看到10ug/ml的ODN2216能够促进A549细胞的生长。2.过表达β-arrestin2能够抑制A549细胞的生长本论文要研究β-arrestin2的功能,因而检测了过表达β-arrestin2对A549细胞的影响。用SRB方法检测过表达β-arrestin2目的基因后A549细胞的存活率,可以看到发现β-arrestin2的存在抑制了A549细胞的生长。3.过表达β-arrestin2能够引起抑制炎性因子mRNA水平由于上述结果表明过表达β-arrestin2能够促进A549细胞的生长,而已经有许多研究表明,在肿瘤细胞中,炎症反应能够促进肿瘤的生长,因而实验中用RT-PCR方法检测了过表达β-arrestin2对A549细胞炎症反应的影响。结果表明β-arrestin2能够抑制A549细胞中炎性因子IL6和IL8的释放。4.β-arrestin2与MAPK信号通路的相互关系由于MAPK信号通路一直被认为与炎症反应有关。已经有报道指出,遭受创伤的患者体内p38MAPK的磷酸化水平以及炎性因子TNFα、IL-6的表达水平都随创伤程度的增加而有所升高,另外的一些研究表明p38MAPK的激活能够引起炎症因子表达量的升高。本论文中,当过表达β-arrestin2后,炎性因子降低,猜测是不是与MAPK信号通路有关,因而用western blot检测p38和JNK的磷酸化水平变化,发现p38和JNK的磷酸化水平均降低。5.β-arrestin2不能抑制Toll-like receptor 9激动剂引起的炎性因子mRNA水平的升高已经有报道指出,TLR-9的激动剂ODN2216能够促进细胞释放炎性因子。因而实验过程中先过表达β-arrestin2,然后再用TLR-9激动剂处理过表达的细胞,。用RT-PCR方法检测炎性因子IL6和IL8的变化,发现β-arrestin2的过表达并不能抑制住TLR-9引起的炎性因子的升高。结论由上述结果可以发现TLR-9的激动剂ODN2216能够促进A549细胞的生长。过表达β-arrestin2后细胞内释放的炎性因子水平降低。过表达β-arrestin2后MAPK信号通路中的P38和JNK的磷酸化水平均降低。但是当用siRNA处理A549细胞后,P38和JNK的磷酸化水平并没有发生显著的升高。过表达β-arrestin2之后,用TLR-9的激动剂处理,发现β-arrestin2并不能抑制Toll-like receptor 9激动剂引起的炎性因子mRNA水平的升高。
【关键词】：肿瘤 非小细胞肺癌 炎症 β-arrestin2 先天免疫 TLR-9 A549细胞系
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 缩略词表12-14
• 前言14-26
• 1. 肺癌与非小细胞肺癌14
• 2. Arrestins和G蛋白偶联受体14-17
• 3. 炎症反应17-19
• 4. MAPK信号通路19-21
• 5. 免疫和TLR921-24
• 6. G418原理24-26
• 第一部分 G418筛选β-arrestin2稳定表达的细胞系26-38
• 前言26-28
• 1. 材料试剂与主要仪器设备28-31
• 2. 实验方法31-34
• 结果34
• 讨论34-35
• 附图35-38
• 第二部分 β-arrestin2过表达对于TLR-9引起的A549细胞炎症反应功能的研究38-56
• 前言38-39
• 1. 材料与主要仪器设备39-43
• 2. 实验方法43-48
• 结果48-49
• 讨论49-50
• 附图50-56
• 第三部分 棕榈酸(PA)引起H9C2细胞系凋亡的机理研究56-66
• 前言56-57
• 1. 材料试剂与主要仪器设备57-58
• 2. 实验方法58-59
• 结果59-60
• 附图60-63
• 讨论63-66
• 参考文献66-74
• 致谢74-75
• 学位论文评阅及答辩情况表75

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