RUNX3抑制小鼠恶性黑色素瘤细胞B16F10迁移并上调WGEF表达的研究

发布时间：2017-11-02 18:31

  本文关键词：RUNX3抑制小鼠恶性黑色素瘤细胞B16F10迁移并上调WGEF表达的研究

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【摘要】：众所周知,癌症是影响到我们人类健康的主要疾病之一,直接威胁到了我们很多人的生命安全。而癌症临床治愈率低的主要原因是由于恶性肿瘤的转移特性。而到目前为止,由于肿瘤转移的高度复杂性,我们还是没有完全深入地理解肿瘤转移的机制。肿瘤的成功转移,首先依靠于肿瘤细胞自身的迁移能力,然后顺利的侵入周围组织,最后成功穿过血管或者淋巴管,在新的部位形成转移灶。也可以说,肿瘤扩散和转移的范围主要依赖于肿瘤细胞的迁移能力。而肿瘤细胞的迁移需要很多步骤的协同调控,其中包括,细胞运动方向的前端突起,胞体向前移动以及尾部收缩等几个阶段。得益于以上几个步骤的不断重复,细胞才能连续不断地向前迁移运动。在这些步骤中,肌动蛋白骨架的重排为细胞前端形成突起及胞体的向前移动提供动力。最近几年的研究表明,在很多的肿瘤中,RUNX3基因作为一种肿瘤抑制基因,其异常的表达在多种肿瘤的发生以及发展中起着重要的作用,但是目前其抑癌机制尚不完全清楚。在本文中,通过划痕实验我们发现,RUNX3能够抑制小鼠恶性黑色素瘤B16F10细胞的迁移,并且影响了细胞的形态和伪足。细胞计数及倒置显微镜观察显示,RUNX3没有影响细胞的增殖和铺展。鬼笔环肽标记结果显示RUNX3能够增强细胞中应力纤维的形成,而使用RhoA的抑制剂可以打断RUNX3对应力纤维的调控。进一步研究发现,RUNX3可以上调鸟嘌呤核苷酸交换因子WGEF (Arhgefl9)的表达。由以上实验结果我们推断,RUNX3可能是通过上调WGEF调控应力纤维的重排而抑制小鼠恶性黑色素瘤细胞B16F10的迁移。
【关键词】：肿瘤细胞迁移 应力纤维 RUNX3 WGEF
【学位授予单位】：东北师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R73-3
【目录】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-8
• 第一章 前言8-19
• 1.1 肿瘤转移及肿瘤细胞迁移8-10
• 1.1.1 肿瘤转移概述8-9
• 1.1.2 肿瘤细胞迁移概述9-10
• 1.2 肌动蛋白骨架概述10-14
• 1.2.1 细胞中的应力纤维10-14
• 1.3 RUNX3基因14-17
• 1.3.1 RUNX3基因结构14
• 1.3.2 RUNX3基因的肿瘤抑制机制14-15
• 1.3.3 RUNX3基因与各种肿瘤的关系15-17
• 1.4 WGEF基因17-18
• 1.4.1 WGEF基因结构17-18
• 1.4.2 WGEF基因生物学功能18
• 1.5 论文的研究目的和意义18-19
• 第二章 实验材料与方法19-23
• 2.1 实验材料19-20
• 2.1.1 细胞和质粒19
• 2.1.2 抗体、试剂和酶19
• 2.1.3 培养基及主要溶液19
• 2.1.4 实验仪器19-20
• 2.2 实验方法20-23
• 2.2.1 细胞计数20
• 2.2.2 划痕实验20
• 2.2.3 免疫荧光标记(Immunofluorescence,IF)20-21
• 2.2.4 细胞转染和建立稳转细胞系21
• 2.2.5 反式聚合酶链式反应(RT-PCR)21-23
• 第三章 实验结果与分析讨论23-29
• 3.1 RUNX3影响B16F10细胞的迁移和形态23-24
• 3.1.1 RUNX3抑制B16F10细胞的迁移23
• 3.1.2 RUNX3改变B16F10细胞的形态23-24
• 3.2 RUNX3不影响B16F10细胞的增殖和铺展24-25
• 3.2.1 RUNX3不影响B16F10细胞的增殖24
• 3.2.2 RUNX3不影响B16F10细胞的铺展24-25
• 3.3 RUNX3调控B16F10细胞肌动蛋白骨架的重排25-26
• 3.3.1 RUNX3对B16F10细胞肌动蛋白骨架的影响25-26
• 3.3.2 RhoA抑制剂可以打断RUNX3对B16F10细胞肌动蛋白骨架的影响26
• 3.4 RUNX3可以上调WGEF的表达26-27
• 3.5 WGEF的表达影响B16F10细胞的形态27-29
• 3.5.1 确立获得表达WGEF的稳转细胞27
• 3.5.2 WGEF影响B16F10细胞的形态27-29
• 第四章 讨论29-31
• 4.1 RUNX3抑制B16F10细胞的迁移,影响其细胞形态29
• 4.2 RUNX3不是通过调控细胞的增殖和铺展抑制其迁移29
• 4.3 RUNX3调控B16F10细胞的迁移和形态是由应力纤维的重排介导的29
• 4.4 RUNX3可能通过上调WGEF调控应力纤维的重排29-31
• 参考文献31-34
• 英文缩写34-35
• 致谢35

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3 梅，

本文编号：1132670