肺癌T7噬菌体文库中MUC1黏蛋白抗原模拟表位的筛选

发布时间：2017-11-03 08:12

  本文关键词：肺癌T7噬菌体文库中MUC1黏蛋白抗原模拟表位的筛选

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【摘要】：背景:作为最常见的癌症之一,肺癌的发病率和致死率在全世界范围内均居于各类型癌症疾病之首,受临床诊断条件的局限性限制,肺癌患者中,有大约80%的人在确诊时就已处于中、晚期,很容易错过手术治疗和多学科治疗的最佳机会,甚至经过了手术治疗的,术后5年生存率仍然非常低(15%)。肺部肿瘤临床上的治疗方面,传统疗法多使用放疗、化疗、手术治疗等,患者要承受巨大的痛苦。肿瘤特异性疫苗治疗癌症,作为传统疗法的一种辅助治疗手段,是近年来研究的热点生物治疗方法。其中,以多肽为基础制备的肿瘤疫苗,成分简单、易获得、制备工艺简洁。模拟表位肽作为天然抗原的低分子模拟物,构象上与天然抗原高度相似,能够在一定程度上诱导天然抗原的特异性体液免疫、特异性细胞免疫,为肿瘤多肽疫苗的开发和应用提供了理论根柢。噬菌体表面展示系统优势是库容大、体积小、可多次扩增,因此能够广泛应用于模拟表位的筛选研究。以单克隆抗体(monoclonal antibody)为筛选配体,对噬菌体展示文库(Phage Display Library)做淘洗筛选,理论上,可以得到目标抗原相对应的模拟表位。在我们的这项研究中,使用抗MUC1蛋白的单克隆抗体,作为对肺癌T7噬菌体表面展示文库(T7 phage library of lung cancer)进行生物淘洗的筛选配基,以筛选结构、功能相似的、肺癌特异性的MUC1模拟表位,并探索该表位肽的肺癌特异性及其在临床诊断和后期疫苗研制中的价值。方法:1.使用的筛选靶分子是抗MUC1单克隆抗体,淘洗扩增后的肺癌T7噬菌体cDNA文库,进行三轮生物淘洗;2.淘洗后得到的噬菌体克隆铺LB平板测定滴度,并挑取噬菌斑进行扩增;3.测序并推导阳性噬菌体克隆的氨基酸序列;4.对阳性噬菌体克隆的剂量依赖性以及肺癌特异性进行试验检测,以确定模拟表位在临床应用的价值。结果:1.成功地扩增了原始的噬菌体文库,并检测其滴度,结果显示扩大培养后的滴度为7×1010pfu/mL,库容为1.85×106pfu/mL,符合试验中质量要求。2.以MUC1单抗为靶分子,淘洗获得20个阳性克隆,测序获得AAPDFRP、SAPDDRP两种氨基酸序列,对MUC1单抗的抑制率均高于50%,与肺癌患者血清结合特异性显著高于与健康人血清结合特异性(P0.05),认为得到的这两种多肽序列能在一定程度上模拟MUC1抗原的功能。3.模拟出上述两种多肽序列的三级结构。结论:成功扩增肺癌T7噬菌体cDNA文库,经生物淘洗和分析判定,筛选获得两种MUC1抗原的模拟表位多肽序列,能够在一定程度上模拟MUC1抗原的生物功能。MUC1抗原的模拟表位序列丰富了肺癌早期诊断及疫苗研制的抗原种类,提供了一种新型的诊断方法,并为肺癌的临床早期诊断、治疗奠定了一定基础。
【关键词】：肺癌 模拟表位 噬菌体文库 MUC1 生物淘洗
【学位授予单位】：河北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第1章 绪论10-16
• 1.1 肺癌10
• 1.2 生物疗法用于肺癌治疗10-12
• 1.2.1 生物治疗10-11
• 1.2.2 模拟表位治疗肿瘤11
• 1.2.3 噬菌体展示系统11-12
• 1.3 MUC1黏蛋白12-15
• 1.3.1 MUC1黏蛋白结构特点12-13
• 1.3.2 MUC1黏蛋白与肿瘤治疗13-14
• 1.3.3 用于筛选抗原模拟表位14-15
• 1.4 研究目的和意义15-16
• 第2章 MUC1黏蛋白模拟表位的筛选16-25
• 2.1 材料与试剂16-19
• 2.1.1 试验材料16-17
• 2.1.2 主要试剂17
• 2.1.3 试剂配制17-18
• 2.1.4 试验仪器18-19
• 2.2 试验方法19-25
• 2.2.1 噬菌体文库滴度测定19-20
• 2.2.2 MUC1 抗原模拟表位的筛选20-22
• 2.2.3 模拟表位的特异性检测22-25
• 第3章 结果与分析25-38
• 3.1 试验结果25-34
• 3.1.1 噬菌体文库扩增后滴度25
• 3.1.2 噬菌体文库的淘洗富集25-27
• 3.1.3 阳性克隆的ELISA分析27
• 3.1.4 阳性克隆的序列分析27-30
• 3.1.5 阳性克隆的特异性检测30-34
• 3.2 分析与讨论34-38
• 3.2.1 试验技术分析34-36
• 3.2.2 试验结果讨论36-38
• 第4章 结论38-39
• 参考文献39-46
• 致谢46-47
• 攻读学位期间取得的研究成果47

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：1135343