TLR7激活对BxPC-3细胞相关细胞因子表达的影响及甲羟戊酸代谢途径对BxPC-3细胞增殖的影响

发布时间：2017-11-04 07:10

  本文关键词：TLR7激活对BxPC-3细胞相关细胞因子表达的影响及甲羟戊酸代谢途径对BxPC-3细胞增殖的影响

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【摘要】：目的探讨TLR7配体Gardiquimod对BxPC-3细胞相关细胞因子表达的影响及其可能的信号机制。方法 (1)培养人原位胰腺癌BxPC-3细胞,细胞经过不同时间点(0h,0.2h,0.5h,1.0 h,3.0 h,6.0 h,12.0 h,24.0 h)TLR7的配体Gardiquimod (3μg/ml)的处理后,实时荧光定量PCR (Real-Time PCR)技术分析细胞因子IFN-λ1、P53、 PTEN、VEGF、MMP-9和TIMP-1在mRNA转录水平的变化；(2)Western Blot技术检测分析可能激活的丝裂原蛋白激活激酶-胞外信号调节激酶(MAPKs-ERK1/2)信号通路；(3)加入MAPKs-ERK1/2特异性阻断剂PD98059阻断信号通路,探讨MAPKs-ERK1/2信号通路对TLR7激活后相关的细胞因子表达的影响。结果(1)实时荧光定量的结果显示,TLR7的激活能够不同程度的上调细胞因子的表达,其中ITN-λ1和MMP-9上调大约3倍,TIMP-1、P53和PTEN上调大约2倍；VEGF的表达呈现随时间波动变化的现象；(2)TLR7的激活剂Gardiquimod能够激活MAPKs-ERK1/2信号通路；(3)特异性阻断剂PD98059能够有效阻断ERK1/2的磷酸化作用；(4)其上述的相关细胞因子的降低与其阻断剂的加入有关。结论发现表明TLR7的激活能够上调IFN-λ1、P53、PTEN、VEGF、MMP-9和TIMP-1等因子的表达,其与MAPKs-ERK1/2信号通路能部分相关。目的 探讨甲羟戊酸代谢途径对细胞增殖的影响及其可能的机制。方法加入羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂-普伐他丁(Pravastatin, PRA),法尼基焦磷酸合成酶抑制剂-阿伦磷酸钠(alendronate, ALD)来阻断甲羟戊酸代谢途径并分析其对细胞增殖的影响。然后我们通过加入下游产物如甲羟戊酸(mevalonic acid, MVA)、胆固醇(Cholesterol, CH)、法尼酯焦磷酸(farnesoldiphosphate,FPP)、牛儿基牛儿焦磷酸(geranylgeranyl pyrophosphate, GGPP)来补充PRA和ALD对细胞的影响,从而分析甲羟戊酸代谢途径中产物对细胞增殖的影响。(1)培养人原位胰腺癌BxPC-3细胞,MTS比色法分析甲羟戊酸代谢途径中产物对细胞增殖的影响。(2)流式细胞技术检测甲羟戊酸代谢途径中产物对细胞周期的影响。(3)Western Blot分析甲羟戊酸代谢途径对细胞的相关增殖蛋白Cyclin B1, P53和信号途径MAPK、PBK-AKT等表达的变化。结果 (1)MTS结果显示：PRA和ALD都能够抑制细胞增殖,MA和PRA同时加入能够补救PRA对细胞的抑制作用,而MA与ALD同时加入则不能补救。CH, FPP和GGPP三者分别单独和PRA或ALD同时加入能够补救PRA和ALD的作用,单独的MA, CH, FPP和GGPP对细胞无太大作用。(2)通过流式细胞检测结果表明：PRA能够阻滞细胞周期于G1,而ALD能够阻滞细胞周期于S。(3)通过Western Blot结果显示,PRA能够上调P53,下调Cyclin E的表达,ALD能够下调CyclinB1的表达；而CH, FPP和GGPP能够对PRA和ALD的效应有部分补救作用,而MA只能补救PRA; PRA能够上调p-P38的表达,ALD能够上调p-AKT的表达。结论 甲羟戊酸代谢途径中的PRA和ALD能够抑制细胞的增殖,CH, FPP和GGPP能够补救PRA和ALD对细胞的抑制作用,而MA只能补救PRA。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R73-3

【参考文献】

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本文编号：1138345