miR-10b调控HOXD10在食管癌侵袭、转移中的研究

发布时间：2017-11-04 09:29

  本文关键词：miR-10b调控HOXD10在食管癌侵袭、转移中的研究

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【摘要】：目的通过检测mi R-10b及其潜在靶基因HOXD10在食管癌细胞及组织中的表达,在细胞中进行基因转染及敲除,检测转染前后细胞的核酸和蛋白表达变化以及侵袭迁移能力的改变情况,探讨二者的调控关系及在食管癌中侵袭、转移的作用。方法通过荧光定量PCR技术及蛋白免疫印迹技术验证30对食管癌组织及癌旁组织和食管癌细胞系KYSE30、KYSE70、KYSE140、KYSE150、EC9706、食管永生化上皮SHEE及其癌变细胞系SHEEC中mi R-10b的表达,分析其表达与临床病理特征的关系,对患者进行电话随访并分析mi R-10b对患者生存预后的影响。利用生物信息软件预测到下游靶基因为HOXD10,验证HOXD10在食管组织和细胞上的表达,并用慢病毒表达载体对mi R-10b低表达食管癌细胞株KYSE30、KYSE140进行过表达转染及对mi R-10b高表达食管癌细胞株EC9706进行敲除,用RT-PCR和Western Blot方法检测HOXD10的表达改变的情况,阐明mi R-10b对HOXD10调控关系,通过Wound healing实验和Transwell实验检测转染及抑制前后细胞株的侵袭、迁移能力,并检测促转移因子MMP-9的表达情况,探明mi R-10b调控HOXD10基因在食管癌侵袭转移中的作用。结果1.食管癌细胞和组织中mi R-10b的表达:食管癌细胞系中,KYSE30、KYSE70、KYSE140、KYSE150细胞系上mi R-10b表达较低,EC9706表达较高,人食管永生化上皮SHEE较其癌变细胞系SHEEC表达低;在组织中,食管癌组织较对应食管癌旁正常组织mi R-10b表达较高(P=0.017),在癌中淋巴结发生转移组mi R-10b较未发生转移高(P=0.038),与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度无关(P0.05);mi R-10b高表达组与低表达组对生存期的影响无明显差异(P0.05)。2.食管癌细胞和组织中HOXD10的表达:在食管癌细胞系中,HOXD10m RNA的表达在KYSE30、KYSE70、KYSE140中表达较高,其余较低,HOXD10蛋白水平表达最高的是KYSE140,最低的是KYSE150;在食管组织中,食管癌组织HOXD10 m RNA水平较对应食管癌旁正常组织较低(P=0.018),蛋白水平同样癌组织低于癌旁组织。3.mi R-10b调控HOXD10基因的表达:生物信息学软件预测提示,HOXD10可能是mi R-10b靶基因之一,在不同细胞系用慢病毒载体过表达或抑制mi R-10b,HOXD10蛋白表达下调或上调(P0.05),对HOXD10 m RNA水平无明显影响(P0.05)。4.mi R-10b促进食管癌细胞的迁移和侵袭:划痕实验和细胞迁移侵袭实验中,mi R-10b在细胞系过表达和抑制前后,细胞的迁移、侵袭能力随着mi R-10b表达上调或下调而增加或降低(P0.05)。敲除HOXD10之后,也可以促进细胞的迁移和侵袭(P0.05),效果类似mi R-10b过表达。5.HOXD10可负调控促转移因子MMP-9影响食管癌侵袭转移:细胞系中HOXD10基因抑制之后,促转移因子MMP-9蛋白水平上调,并且MMP-9在食管癌组织中呈高表达。结论1.mi R-10b在食管癌中表达上调,与淋巴结转移关系密切。2.HOXD10是mi R-10b的下游靶点,mi R-10b负调控HOXD10增强食管癌细胞的侵袭迁移能力。3.mi R-10b促进食管癌侵袭转移的作用机制可能是通过负调控HOXD10从而上调MMP-9而实现。
【学位授予单位】：河南科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.1

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