雷替曲塞对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

发布时间：2017-11-10 01:21

  本文关键词：雷替曲塞对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

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【摘要】：目的本研究旨在通过体内外实验研究雷替曲塞对胃癌细胞增殖、凋亡的影响,并对有关作用的特点及其机制进行深入探讨,为雷替曲塞治疗胃癌的临床研究提供可靠的实验数据和理论支持。方法(1)体外培养人胃癌SGC-7901细胞,采用CCK-8法检测雷替曲塞在不同浓度和作用时间下对各组细胞的增殖抑制作用。(2)通过Hoechst 33258荧光染色法,观察雷替曲塞对胃癌细胞凋亡形态学的改变。(3)采用流式细胞仪法,检测雷替曲塞作用胃癌细胞后凋亡程度变化及细胞周期分布阻滞情况;并进一步分析雷替曲塞对线粒体膜电位及活性氧含量的影响。(4)Western Blot法检测雷替曲塞应用对凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cyt-c和caspase-3表达的影响。(5)构建胃癌裸鼠移植瘤模型,观察不同剂量雷替曲塞在体内对胃癌生长的抑制作用;免疫组化法检测对照组与不同剂量实验组之间Ki67、PCNA表达的差异;TUNEL法观察肿瘤组织中胃癌细胞的凋亡情况;并通过Western Blot法检测Bax和caspase-3蛋白的表达变化。结果(1)雷替曲塞对人胃癌SGC-7901细胞具有增殖抑制作用,呈现明显的时间和剂量依赖性。(2)雷替曲塞能够诱导胃癌细胞发生凋亡,Hoechst 33258染色可见核固缩、核碎裂及凋亡小体等典型的细胞凋亡形态学变化。(3)雷替曲塞明显地阻滞细胞周期于G0/G1期,而使较少的细胞停留在G2/M期。(4)雷替曲塞可使细胞线粒体膜电位下降、活性氧含量升高。(5)雷替曲塞能够增强细胞中Bax、cyt-c、caspase-3蛋白的表达,并抑制Bcl-2蛋白的表达。(6)通过建立胃癌裸鼠移植瘤模型,发现雷替曲塞能够显著抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长;免疫组化结果显示,雷替曲塞抑制了移植瘤组织中Ki67、PCNA表达水平;TUNEL法验证了雷替曲塞具有诱导移植瘤细胞凋亡的作用,其可能与增强Bax、caspase-3蛋白的表达水平有关。结论(1)体外实验中,雷替曲塞对胃癌细胞具有一定的增殖抑制作用,促进细胞凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期,并使细胞线粒体膜电位下降、活性氧含量升高;其机制可能是通过上调Bax、cyt-c、caspase-3表达、下调Bcl-2表达而实现的。(2)体内实验中,雷替曲塞能够抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长,降低Ki67、PCNA的表达;同时通过提高Bax、caspase-3的表达来诱导细胞发生凋亡。(3)本研究为雷替曲塞治疗胃癌提供了实验室数据,亦为今后开展相关临床研究提供了理论依据。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2

【参考文献】

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1 王佳蕾;李进;秦叔逵;程颖;张清媛;刘天舒;杨春康;叶正宝;徐农;郑磊贞;胡春宏;张沂平;陶敏;于志坚;庄志祥;;雷替曲塞或氟尿嘧啶/亚叶酸钙联合奥沙利铂治疗局部晚期或复发转移性结直肠癌的随机对照多中心Ⅲ期临床试验[J];临床肿瘤学杂志;2012年01期

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本文编号：1164447