miRNA-429对人乳腺癌Bcap37细胞生物学行为的调控及相关研究

发布时间：2017-11-20 17:31

  本文关键词：miRNA-429对人乳腺癌Bcap37细胞生物学行为的调控及相关研究

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【摘要】：一、研究背景和目的乳腺癌是一种异质性的疾病,居女性肿瘤相关死亡率第二位,包括了大量各种不同的临床特征。在过去的十年中,大量研究证实乳腺癌可分为多个分子亚型:luminal A亚型、luminal B亚型、HER2过表达亚型、基底细胞样亚型和正常细胞样亚型或更多分子亚型[1,2]。其中,Luminal亚型的基因表达主要与雌激素受体(ER)和/或孕激素受体(PR)阳性的表达相关;HER2过表达亚型表现为HER2受体的过表达以及邻近基因17q12 21的扩增;基底样亚型是由基底/肌上皮标记表达来定义且普遍缺乏ER、PR和HER2的表达。重要的是,不同分子亚型有特定的m RNA表达谱,这些特定的m RNA表达谱部分归因于不同的mi RNA的表达[3]。有研究通过将乳腺癌与癌旁组织进行对比,揭示了乳腺癌组织中mi RNA失调的普遍模式,提示了在乳腺癌的发展中mi RNA失调的重要性[4]。mi R-429属于一个mi RNA家族,该家族包括mi R-200c、mi R-141、mi R-200b和mi R-200a[5]。mi R-429在生物体内发挥着正常的生物学功能[6,7],特异性地表达于人类胚胎干细胞中[8],但同时其异常表达也参与影响肿瘤干细胞和各种肿瘤的功能[9-13],但其在乳腺癌中的表达情况及功能情况尚未见报道。本研究中,我们发现在人乳腺癌Bcap37细胞系中mi R-429的表达低,进一步的研究表明mi R-429的过表达促进人乳腺癌Bcap37细胞的增殖和迁移,进而促进乳腺癌的发展和转移。二、研究方法1.利用Realtime-PCR探针法检测人乳腺癌细胞系BT20、BT474、Bcap37、SK-BR-3、MCF7、T-47D和MDA-MB-231中mi R-429的表达情况,从中选择出mi R-429表达最低的细胞系;2.通过Hsa-mi R-429过表达慢病毒和对照病毒转染Bcap37乳腺癌细胞,建立稳定过表达mi R-429的人乳腺癌细胞系Bcap37及其对照细胞系;3.利用RT-PCR探针法检测过表达mi R-429的人乳腺癌细胞系Bcap37及其对照细胞系中mi R-429的表达情况,确定转染效率;4.稳定过表达mi R-429的人乳腺癌细胞系Bcap37及其对照细胞系分别采用MTT法、划痕实验、Transwell实验等方法观察表达mi R-429后对人乳腺癌细胞系Bcap37增殖、迁移、转移能力等生物学特性的影响;5.利用Realtime-PCR探针法检测稳定过表达mi R-429的人乳腺癌细胞系Bcap37及其对照细胞系对Shp2、FBXW11、GLI3、RAP1B、CSNK1G3、MAP3K5、MAP4K3、PPM1B等基因相关m RNA转录水平的影响。三、研究结果1.利用Realtime-PCR探针法检测结果显示:mi R-429在乳腺癌细胞系都有不同程度表达,BT20和T47D细胞系表达量最高,BT474、、SK-BR-3、MCF7和MDA-MB-231细胞系表达量相当,而mi R-429在Bcap37细胞中表达量最低;2.将hsa-mi R-429过表达慢病毒感染人乳腺癌Bcap37细胞,经筛选后得到hsa-mi R-429过表达Bcap37稳转细胞株。利用Realtime-PCR探针法检测结果显示,与对照组相比,hsa-mi R-429过表达稳转Bcap37细胞株中mi R-429的表达水平显著增加;3.MTT法检测Mi R-429过表达处理对细胞增值的影响。培养24h、48h、72h后,Bcap37细胞过表达Mi R-429组的在490nm处的吸光度均明显高于与对照组,说明mi R-429能显著促进Bcap37细胞的增殖;4.划痕实验显示,与对照组相比,hsa-mi R-429过表达稳转Bcap37细胞株的迁移能力显著增强;Transwell细胞迁移实验得到与上述类似的结果;5.乳腺癌相关基因转录的差异:hsa-mi R-429过表达稳转Bcap37细胞株中Shp2的相对表达水平高于对照组,而FBXW11、GLI3、RAP1B、CSNK1G3、MAP3K5、MAP4K3、PPM1B等基因相关m RNA转录水平均低于对照组。四、结论目前研究表明,mi RNA与家族性乳腺癌、雌激素相关受体、HER2、乳腺癌的复发转移以及相关化学治疗耐药等密切相关。本研究旨在研究mi R-429对乳腺癌细胞生物学功能的影响。通过过表达mi R-429探究了mi R-429对人乳腺癌Bcap37细胞功能的影响。与之前的大多数研究基本一致,我们发现mi R-429上调后能显著促进人乳腺癌Bcap37细胞的增殖;同时与对照的细胞相比,无论是划痕实验还是transwell实验,过表达mi R-429的Bcap37细胞具有更强的迁移能力。在此证明mi R-429促进乳腺癌细胞的增殖及迁移,从而促进乳腺癌的发展、转移。
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 王瀚;;肿瘤常见标志物及其应用[J];甘肃高师学报;2014年02期

2 唐求;尹建平;;恶性肿瘤输血研究新进展[J];中国输血杂志;2015年07期

3 Maria Dalamaga;;Interplay of adipokines and myokines in cancer pathophysiology: Emerging therapeutic implications[J];World Journal of Experimental Medicine;2013年03期

4 Maria Dalamaga;;Obesity, insulin resistance, adipocytokines and breast cancer: New biomarkers and attractive therapeutic targets[J];World Journal of Experimental Medicine;2013年03期

5 Maria Dalamaga;Evangelia Papadavid;;Adipocytokines and psoriasis: Insights into mechanisms linking obesity and inflammation to psoriasis[J];World Journal of Dermatology;2013年04期

6 邓婷婷;陈彬;王继红;;HER2变异体在乳腺癌进程和赫赛汀抵抗中的临床意义[J];现代肿瘤医学;2015年06期

7 肖永波;张晓;黄小杏;;组织学病理学和分子分类对乳腺癌的病理诊断价值[J];实用癌症杂志;2015年03期

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1 王瀚;人结直肠癌多肽探针的实验研究[D];陕西师范大学;2013年

2 相磊;ABCG2、Hif-2a在乳腺癌中的表达及其与多药耐药关系的初步研究[D];山东大学;2013年

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1 耿娇;内脂素在子宫内膜癌组织中的表达及意义[D];天津医科大学;2013年

2 谈海英;血清脂联素及内脂素水平与子宫内膜癌关系临床意义探讨[D];大连医科大学;2014年

3 程波;TCERG1L在乳腺导管原位癌、浸润性导管癌中的表达及其与临床病理参数相关性研究[D];南昌大学;2014年

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本文编号：1207981