肝癌潜在标志物循环microRNAs定量检测技术的研究

发布时间：2017-11-21 16:20

  本文关键词：肝癌潜在标志物循环microRNAs定量检测技术的研究

  更多相关文章： miRNAs 磁性纳米颗粒 化学发光检测 荧光定量PCR 肝癌

【摘要】：microRNAs (miRNAs)是一类长度约为22个碱基的保守性非编码小分子RNA,通过与目标信使RNAs (message RNAs, mRNAs)的3’非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR)结合进行转录后调控,影响细胞生理活动。研究表明,多种肝脏疾病的发生发展过程均伴随有miRNAs的异常表达,使得miRNAs作为肝病潜在标志物成为研究热点。最近,miRNAs的高度稳定性引起了人们的广泛关注,它们存在于所有体液环境中,或被脂质囊泡包裹,或与蛋白质结合,免于RNase的降解。循环miRNAs与肝脏的病理状态同样具有紧密的联系,这使得循环miRNAs可能为无创肝病诊断提供有效的解决方案。准确测定miRNAs在特定细胞、组织、体液中的表达量是将miRNAs作为标志物应用于疾病诊断与预后监测的关键性步骤。本论文建立的miRNAs检测技术,具有特异性好、灵敏度高、线性范围广等特点,并能够用于临床血清样本miRNAs定量检测,在疾病早期诊断与预后评估中有潜在应用前景。主要内容如下：1.基于磁性纳米颗粒和化学发光技术的miRNAs检测方法的建立与应用建立了一种基于磁性纳米颗粒和化学发光技术的miRNAs检测方法。目标miRNAs与固定在Fe3O4@SiO2磁性纳米颗粒上的捕获探针和标记有生物素的信号探针杂交,通过生物素-链霉亲和素作用进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)标记,ALP与其化学发光底物3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3”-磷酰氧基)苯-1,2-二氧杂环丁烷(AMPPD)作用产生化学发光信号,从而进行检测。研究结果表明,该方法特异性较好,能够灵敏地区分完全配对(阳性组)和完全错配(阴性组)目标序列,检测限达60 fM,线性范围(10-2-104 pM)覆盖6个数量级,能够用于临床血清样本中miRNAs检测,具有潜在应用价值。2.基于实时荧光定量PCR技术的miRNAs检测方法的应用应用poly(A)聚合酶加尾定量PCR对血清样本中miR-21进行定量检测。定量结果与采用第2章方法的定量结果比较,发现两种方法对血清样本miR-21的定量结果基本一致,表明第2章建立的基于磁性纳米颗粒和化学发光技术的miRNAs检测法能够用于1niRNAs定量,定量结果准确度高、重复性好。3.肝癌相关miRNAs相对表达水平的化学发光检测应用建立的基于磁性纳米颗粒和化学发光技术的niRNAs检测方法对临床血清样本进行miR-21、miR-122和miR-221相对表达水平检测(miR-16作为内参进行校正),并比较评价了三种miRNAs对肝癌的诊断效果。三种miRNAs均具有较好的区分肝癌样本和正常对照的能力,能够作为肝癌疾病的潜在标志物应用于临床诊断。
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7;R730.43

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本文编号：1211533