反向PCR精确定位人结肠癌SW480细胞CD133基因启动子区脱氧核糖核酸酶Ⅰ高敏感位点

发布时间：2017-11-25 09:00

  本文关键词：反向PCR精确定位人结肠癌SW480细胞CD133基因启动子区脱氧核糖核酸酶Ⅰ高敏感位点

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【摘要】：目的:利用反向PCR(inverse-PCR)方法精确定位人结肠癌SW480细胞CD133基因启动子区对脱氧核糖核酸酶I(DNase I)酶切敏感位点,探讨此方法在研究肿瘤细胞基因调控方面应用的可行性。方法:以人结肠癌细胞系SW480为研究模型,细胞培养数量达到107时提取细胞核,10U/ml DNase I切割SW480细胞核中的染色质后,按照苯酚/氯仿/异戊醇(10:10:1)方法提取基因组,用限制性内切酶Eco RI和Xmal I片段化基因组,通过末端补平、T4连接酶连接成环等过程,利用反向PCR扩增产物,并将PCR产物经纯化后连入p MD-18 T载体,转入到大肠杆菌TOP10株中进行表达,筛选阳性克隆进行基因测序。结果:通过测序,人结肠癌SW480细胞CD133基因转录起始点上游9个DNase I高敏感位点被鉴别出来,它们位于第一个外显子-700~-300bp碱基区域内。结论:应用反向PCR的技术可以精确测定DNase I对人结肠癌SW480细胞CD133基因启动子区的剪切位点,而且这些位点聚集在一个特定的区域。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.35

【参考文献】

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1 冯银;袁金玲;伍勇;漆涌;陈体;;反向PCR扩增Ⅰ类整合酶基因侧翼序列[J];国际检验医学杂志;2013年08期

2 杜志杰;董金W，

本文编号：1225440