马钱子碱对人肺癌细胞株PC-9凋亡及周期影响的研究

发布时间：2017-12-02 09:23

  本文关键词：马钱子碱对人肺癌细胞株PC-9凋亡及周期影响的研究

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【摘要】：目的:1、观察马钱子碱对人肺癌细胞株PC-9生长和增殖的影响;2、采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测马钱子碱对人肺癌细胞株PC-9凋亡的影响,并初步探讨其机制;3、采用PI染色法观检测马钱子碱对人肺癌细胞株PC-9周期的影响,并初步探讨其机制。方法:1、以人肺癌细胞株PC-9为研究对象,将其分为4组:空白对照组、DMSO对照组(2‰)、150μM马钱子碱组、300μM马钱子碱组,体外培养PC-9细胞,采用Cell Titer-Glo发光法、平板克隆形成实验及Ed U(5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷)掺入法观察该药对PC-9细胞生长和增殖的影响;2、采用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测各组体外培养细胞凋亡率,PI单染法检测各组PC-9细胞周期比例;3、采用RT-PCR法检测马钱子碱对各组体外培养细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3 m RNA表达水平的影响,采用实时荧光定量PCR法(q RT-PCR)检测各组细胞周期相关基因Cyclin D1、Cyclin E m RNA的表达水平,蛋白印迹法(Western blotting)检测细胞凋亡及周期相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cyclin D1、Cyclin E蛋白的表达。结果:1、马钱子碱可以抑制人肺癌细胞株PC-9的生长和增殖,并呈时间-浓度依赖性,且与对照组相比,各组差异均有统计学意义(P0.05)。Cell Titer-Glo发光法显示:高浓度马钱子碱组(800μM)在24h、48h、72h对PC-9细胞抑制率分别达到了63%、89%、96%;平板克隆形成实验结果显示:150μM马钱子碱组、300μM马钱子碱组抑制PC-9细胞克隆形成率分别为58%、88%;Ed U掺入法结果显示:150μM马钱子碱组、300μM马钱子碱组抑制PC-9细胞Ed U阳性率(%)分别为:18%、55%。2、流式结果显示马钱子碱可以诱导PC-9细胞凋亡,且与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05);PI染色法结果显示马钱子碱对细胞周期的影响主要是阻滞PC-9细胞于G0/G1期,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.01);3、RT-PCR、q RT-PCR和Western blotting结果显示:随着马钱子碱浓度的增加,抗凋亡基因Bcl-2 m RNA和蛋白表达明显降低,,而促凋亡基因Bax、Caspase-3 m RNA和蛋白表达均明显升高;而细胞周期相关基因Cyclin D1、Cyclin E m RNA和蛋白的表达水平则随着马钱子碱浓度的提高而降低。结论:1、马钱子碱可以抑制人肺癌细胞株PC-9的生长和增殖;2、马钱子碱可以诱导人肺癌细胞株PC-9凋亡,其分子机制可能与激活Bax、Caspase-3和抑制Bcl-2等凋亡调控基因有关;3、马钱子碱阻滞人肺癌细胞株PC-9于G0/G1期,机制主要与其通过下调Cyclin D1、Cyclin E表达有关。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2

【参考文献】

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本文编号：1244423