MicroRNA-27b，microRNA-101和microRNA-128调控血管内皮生长因子-C抑制胃癌血管生成的研

发布时间：2017-12-10 01:10

  本文关键词：MicroRNA-27b，，microRNA-101和microRNA-128调控血管内皮生长因子-C抑制胃癌血管生成的研究

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【摘要】：背景：胃癌是一种常见的恶性肿瘤,尽管根治手术有一定效果,但是具有远处转移的患者预后却非常差。转移是胃癌患者癌细胞扩散的主要途径之一。VEGF-C是血小板源生长因子家族成员之一,它不仅能够与VEGFR-3结合引起淋巴管新生,而且也可以和VEGFR-2结合引起血管内皮细胞的增殖和迁移。研究表明肿瘤细胞可以分泌VEGF-C,通过自分泌方式作用于癌细胞本身促进其迁移和浸润能力。VEGF-C在肿瘤发展的过程中发挥着重要作用。然而调控VEGF-C的机制目前尚不清楚。MiRNAs是近期肿瘤研究的前沿热点之一。研究表明,miRNAs可通过直接作用于靶mRNA参与调控蛋白翻译及mRNA稳定性作用。本研究旨在探讨调控VEGF-C表达的机制,并验证靶向调控VEGF-C的miR-27b,miR-101和miR-128对胃癌细胞迁移,浸润能力及血管内皮细胞增殖,迁移和血管生成能力的影响。并且研究了3个miRNAs对胃癌患者预后的影响。方法：收集胃癌组织标本,完善病例临床资料。免疫组织化学方法检测103例胃癌标本中VEGF-C的表达及血管和淋巴管数量,分析VEGF-C与胃癌患者临床病理参数,血管和淋巴管数量的关系。双荧光素酶报告基因检测验证靶向调控VEGF-C的miRNAs。Westerm-Blot检测miR-27b, miRNA-101和miRNA-128过表达后靶基因VEGF-C表达的改变,验证3个miRNAs的确可以调控VEGF-C的表达。瞬时转染miRNA-27b, miRNA-101和]miRNA-128至胃癌细胞系,Tanswell迁移与浸润试验检测胃癌细胞系迁移与浸润能力及血管内皮细胞迁移能力的改变；EdU实验检测血管内皮细胞的增殖能力变化；小管形成实验检测血管内皮细胞的新生血管形成能力。提取103例胃癌组织、12例癌旁非肿瘤组织及3种胃癌细胞系中的RNA,逆转录并用实时荧光定量检测miR-27b,miR-101和miR-128的表达。结果：临床病理参数分析显示VEGF-C的表达与肿瘤大小,TNM分级,临床分期相关,VEGF-C的表达与血管密度和淋巴管密度呈正相关,并且miR-27b, miR-101, miR-128与VEGF-C的表达及血管密度都呈现负相关。通过1miRanda, TargetScan, miRWalk软件预测并结合相关文献初步选定5个能与VEGF-C 3'UTR结合的miRNAs,包括miR-27b, miR-101, miR-128, miR-144和miR-186,分别进行双荧光素酶实验检测,证实miR-27b, miR-101和miR-128对VEGF-C有明显的调控作用。Western Blotting实验结果显示：过表达miR-27b, miR-101和miR-128组与对照组相比, VEGF-C蛋白表达显著降低,进一步验证miR-27b,miR-101和miR-128确实可以靶向调控VEGF-C的表达。Tanswell迁移与浸润试验证实转染miR-27b, miR-101, miR-128后,胃癌细胞MKN-45和SGC-7901的迁移与浸润能力以及均受到明显抑制。将这3个miRNAs分别转染入胃癌细胞,取培养48小时之后的胃癌细胞上清悬液用来培养血管内皮细胞,这种条件下培养的血管内皮细胞做Tanswell迁移,EdU及tube formation实验,结果显示血管内皮的迁移能力,增殖能力及新生血管生成能力都受到明显抑制。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)定量检测miR-27b, miR-101和miR-128的表达证实：miR-27b, miR-101和miR-128在胃癌各组样本中均有表达；与癌旁非肿瘤组织相比,这3个miRNAs在胃癌组织和3种胃癌细胞系中表达明显降低；但是3个miRNAs的表达量与临床病例参数分析没有意义。结论：我们证实miR-27b, miR-101, miR-128通过下调VEGF-C表达抑制胃癌细胞的迁移和浸润能力以及血管内皮细胞的增殖,迁移和小管形成能力。并且,3个miRNAs通过下调VEGF-C的表达抑制了胃癌组织血管生成从而起到抑制胃癌进展的作用。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2

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本文编号：1272543