线粒体DNA8272位点微卫星不稳定与非霍奇金淋巴瘤相关性研究

发布时间：2017-12-14 13:01

  本文关键词：线粒体DNA8272位点微卫星不稳定与非霍奇金淋巴瘤相关性研究

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【摘要】：目的:淋巴瘤是血液系统的恶性肿瘤,根据组织病理学分为霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤两大类,非霍奇金淋巴瘤又包括众多亚型。每种亚型的预后各不相同,对预后的评价体系也有多个标准。目前主要采用国际预后指数(IPI评分)对非霍奇金淋巴瘤评价预后,但其有一定局限性,尚不能完全满足临床需求,需探索新的预后指标,指导个体化治疗。微卫星(Microsatellite)是广泛存在于原核和真核生物基因组中具有高度多态性的、短的、串联重复的核苷酸序列。微卫星不稳定性(Microsatellite instability MSI)是指在短核苷酸序列在复制过程中发生的重复错误,这种重复单位的插入或缺失造成的微卫星长度的改变,重复序列一般以1-6bp居多。MSI是遗传不稳定的一种表现形式,包括细胞核MSI(n MSI)和线粒体微卫星不稳定性(mt MSI)。近年研究发现,线粒体MSI在肿瘤的发生发展及预后评估中起重要作用。本研究组前期在有关肾癌的系列研究中,发现线粒体(mtDNA)non-D-loop(5892、8272、8280、8281、8289、9777)6个位点中,8272位点肾脏肿瘤的发生及预后有明显相关性。此位点线粒体MSI与淋巴瘤关联的研究目前国内外未见报道。本实验试图研究mtDNAnon-D-loop区8272位点GGGGGTAGA9-bp插入/缺失造成的微卫星不稳定性与非霍奇金淋巴瘤的发病及临床特征、预后的相关性,以探讨非霍奇金淋巴瘤可能的预后指标。方法:1标本来源:病例组标本均来自于2005年01月~2010年01月间就诊于河北医科大学第四医院血液科的139例经免疫组化确诊的非霍奇金淋巴瘤的成人患者,年龄14-81岁,中位年龄49岁,其中T细胞性淋巴瘤患者占69例(49.6%),主要为ALK间变T细胞性、外周T细胞性(非特指型)、T淋母细胞淋巴瘤等类型。B细胞淋巴瘤患者占70例(50.4%),其中惰性淋巴瘤共28例,包括小淋巴细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤等;侵袭性淋巴瘤占42例(包括弥漫大B细胞性、套细胞淋巴瘤、B淋巴母细胞淋巴瘤等)。抽取治疗前患者5ml外周静脉血血液标本。正常对照组标本为河北医科大学第四医院进行体检的98例身体健康的成人外周静脉血标本。2实验方法:2.1提取DNA:应用GENMED试剂盒法提取实验组及正常对照组血标本的DNA,提取后将其置于-80℃恒温冰箱中保存备用。2.2聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)、变性聚丙烯酰胺凝胶、测序:采用PCR扩增(扩增片段为200bp),经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳证实目的基因的存在。将PCR扩增产物送往上海生工生物工程股份有限公司测序。获得mtDNA non-D-loop(5892、8272、8280、8281、8289、9777)6个位点中测序结果,对照正常人类线粒体数据库基因序列,得出插入/缺失序列病例,用作下一步分析。预实验发现是否存在mtDNAnonD-loop(5892、8280、8281、8289、9777)5个位点的插入/缺失与总体非霍奇金淋巴瘤淋巴瘤的预后及非霍奇金淋巴瘤亚型(T细胞性、B细胞性)的预后均无相关性。因此此实验对mtDNAnon-D-loop8272位点与淋巴瘤预后的关系行以下研究。2.3统计分析:所有数据结果分析应用SPSS19.0统计软件,P0.05,认为有统计学意义。生存分析单因素分析,应用Kaplan-Meier法;多因素生存分析应用COX比例风险模型。应用卡方检验和Fisher’s确切概率法分析不同分组在mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失发生率的不同。结果:1实验组、正常对照组发生mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失率关系的比较.实验组共139例非霍奇金淋巴瘤患者,有16例发生mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失,占11.5%。正常对照组共98例,发生5例mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失,占5.1%。两者比较P=0.087,差别无统计学意义。2 mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失现象发生率在T细胞淋巴瘤为9例,占13.0%;在B细胞淋巴瘤7例,占10%,两组比较,P=0.574,差别无统计学意义。3侵袭性B细胞淋巴瘤mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失发现3例,占7.9%,惰性B细胞淋巴瘤mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失发生4例,占12.5%。两组比较,P=0.403,差别无统计学意义。4有无mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失与总体非霍奇金淋巴瘤预后之间的关系,5年生存率分别是33.3%、26.7%,单因素分析P0.05,差别无统计学意义。5 T细胞淋巴瘤及B细胞淋巴瘤的临床特征与mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失现象发生率关系的研究(Fisher’s确切概率法)依据患者临床特征[年龄、性别、IPI评分、LDH(乳酸脱氢酶lacate dehydrogenas)、HBDH(α-羟丁酸脱氢酶alpha-hydroxybutyric dehydrogenase)、分期、病理类型、β2微球蛋白、骨髓浸润]分组,比较有无mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失现象与T细胞淋巴瘤及B细胞淋各临床特征无相关性,P值均0.05。6 T细胞淋巴瘤中发生mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失5年生存率55.6%,mtDNA8272GGGGGTAGA序列正常的5年生存率16.4%,P=0.046,差别有统计学意义。B细胞淋巴瘤中发生mtDNA8272位点9-bp插入/缺失5年生存率42.9%,mtDNA8272GGGGGTAGA序列正常的5年生存率36.8%,P=0.672,差别无统计学意义。7 T细胞淋巴瘤预后多因素分析将T细胞淋巴瘤患者的mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失、IPI评分、LDH、HBDH、分期、分型、β2微球蛋白、骨髓浸润纳入多因素COX回归模型进行统计分析,显示mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失和LDH升高对5年生存率的影响有统计学意义,P0.05。结论:1有无mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失与非霍奇金淋巴瘤淋巴瘤总体发病风险无关。2 mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失与非霍奇金淋巴瘤的分型及不同亚型淋巴瘤患者临床特征无关。3有无mtDNA8272GGGGGTAGA插入/缺失与总体非霍奇金淋巴瘤淋巴瘤及B细胞淋巴瘤预后无关。与T细胞淋巴瘤预后有一定相关性。4 mtDNA 8272GGGGGTAGA插入/缺失及LDH增高是T细胞淋巴瘤患者预后的独立影响因素。mtDNA8272GGGGGTAG插入/缺失阳性病例及LDH正常者预后好。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.1

【参考文献】

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1 张相国;李警锋;何宗师;徐达;黄伟;廖卫坚;;鼻咽癌微卫星不稳定性与其预后相关性的临床研究[J];实用癌症杂志;2014年12期

2 罗春英;邓飞;黄照权;卢运龙;黄永秩;;T细胞非霍奇金淋巴瘤微卫星不稳定性及hMSH2、hMLH1蛋白表达研究[J];广西医科大学学报;2011年04期

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本文编号：1287968