miR-450a-5p在浆液性卵巢癌中的表达及功能初步研究

发布时间：2017-12-15 03:15

  本文关键词：miR-450a-5p在浆液性卵巢癌中的表达及功能初步研究

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【摘要】：研究背景:上皮性卵巢癌是妇科最致命的恶性肿瘤,占所有卵巢癌75%~90%,其中浆液性卵巢癌又占全部上皮性卵巢癌的60%~70%。因早期阶段的卵巢癌无明显可察觉症状及体征,并且目前缺少有效的早期诊断及早期治疗手段,故70%以上病人就诊时已属晚期,平均5年生存率低于30%,死亡率居所有女性生殖道癌症的第一位。Micro RNAs(mi RNAs)是内源性非编码小RNA,在转录后水平调控基因的表达,参与了正常细胞的增殖,细胞分化,细胞代谢及细胞凋亡等生物生理进程,也与多种肿瘤的发生发展密切相关。根据调控靶基因不同,mi RNAs可作为抑癌基因或癌基因参与肿瘤发生、转移、耐药等病理进程。目前mi RNAs与浆液性卵巢癌的研究也有报道,但作用机理尚不十分明确。目前国外研究人员认为,浆液性卵巢癌主要起源于输卵管上皮,且以伞端多见。本实验组前期以正常输卵管伞端组织为对照,经mi RNA芯片筛选,发现mi R-450a-5p在浆液性卵巢癌组织中表达量显著下调,且其功能机制尚未在卵巢癌中研究报道。故本实验组选取mi R-450a-5p为研究分子,以正常人输卵管伞端为对照,通过初步科学研究,希望mi R-450a-5p能成为早期诊断、治疗及预防浆液性卵巢癌的重要生物学分子。基于前期芯片结果,本实验组拟:(1)应用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术检测大样本中mi R-450a-5p的表达差异情况,并分析mi R-450a-5p各组表达水平和浆液性卵巢癌临床病理特征之间的相关性;(2)通过转染mi R-450a-5p mimics构建过表达mi R-450a-5p的浆液性卵巢癌SKOV3细胞系,通过细胞功能学实验研究过表达的mi R-450a-5p对SKOV3细胞系肿瘤生物学行为的影响;(3)通过免疫印迹实验(western blot)及双荧光素酶报告基因实验(dual-luciferase reporter gene assay)验证mi R-450a-5p的靶基因及调控浆液性卵巢癌发生发展的可能分子信号通路机制,为临床治疗卵巢癌提供新的理论依据。目的:1.检测mi R-450a-5p在浆液性卵巢癌中的表达情况,并分析mi R-450a-5p的表达与浆液性卵巢癌临床病理特征之间的关系。2.研究mi R-450a-5p对人浆液性卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移、侵袭、周期、凋亡肿瘤生物学行为的影响。验证mi R-450a-5p的靶基因,探讨其在浆液性卵巢癌中发生发展的作用机制。方法:1.选取101例浆液性卵巢癌石蜡包埋组织及50例正常输卵管伞端石蜡包埋组织。所有样本的选取均由2位资深病理专家判读完成。2.用q RT-PCR技术验证芯片结果,并分析mi R-450a-5p表达水平和临床病理特征分组之间相关性。3.用mi R-450a-5p mimics转染人浆液性卵巢癌SKOV3细胞,构建过表达mi R-450a-5p的细胞系,并设阴性对照组(NC)及空白对照组(Blank),通过MTT实验检测细胞增殖能力、Transwell迁移实验和划痕实验检测细胞迁移能力、Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力、流式细胞术检测细胞周期及凋亡。4.使用生物信息学软件预测mi R-450a-5p可能调控的靶基因,查阅相关文献,选定靶基因。5.用western blot及dual-luciferase reporter gene assay验证mi R-450a-5p可能的靶基因。6.结果采用SPSS19.0软件进行统计学处理,独立样本的t检验,P0.05差异认为有统计学意义。结果:1.Mi R-450a-5p在浆液性卵巢癌组织中的表达水平显著低于正常输卵管伞端组织。2.Mi R-450a-5p的表达水平与浆液性卵巢癌临床病理特征之间差异均无统计学意义。3.MTT实验:过表达mi R-450a-5p组细胞增殖活力与NC组、blank组无明显差异,提示了mi R-450a-5p对SKOV3细胞系的增殖活力无明显影响。Transwell迁移及侵袭实验均显示转染mi R-450a-5p mimics后,细胞的迁移及侵袭能力明显减弱,提示过表达的mi R-450a-5p不仅抑制了SKOV3细胞系的迁移能力,对其侵袭能力也有抑制。细胞划痕实验:Mi R-450a-5p mimics组细胞迁移能力较NC组、blank组降低,提示过表达的mi R-450a-5p抑制了SKOV3细胞系的迁移能力。流式细胞术:过表达mi R-450a-5p后,mimics组细胞周期明显被阻滞于G1期;Mi R-450a-5p mimics组、N C组、blank组凋亡结果无明显差异。4.通过生物学软件预测mi R-450a-5p靶基因并结合相关文献,分析DUSP10可能为mi R-450a-5p的靶基因。5.通过western blot实验发现mi R-450a-5p mimics组DUSP10蛋白表达水平显著性降低;Dual-luciferase reporter gene assay实验提示mi R-450a-5p的靶基因为DUSP10。结论:1.以正常输卵管伞端为对照,经大样本验证,mi R-450a-5p在浆液性卵巢癌中呈显著性低表达,提示mi R-450a-5p可能参与了浆液性卵巢癌的发生、发展。2.过表达浆液性卵巢癌SKOV3细胞系mi R-450a-5p后,可降低SKOV3细胞侵袭及迁移能力,并将细胞周期阻滞于G1期。3.Mi R-450a-5p靶基因可能为DUSP10,通过mi R-450a-5p/DUSP10/MAPKs通路调节浆液性卵巢癌进展。4.Mi R-450a-5p可能作为抑癌基因在浆液性卵巢癌的发生、发展中发挥了作用,有望成为早期诊断及靶向治疗浆液性卵巢癌的新的生物分子。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31

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本文编号：1290407