抗氧化蛋白Prdx6在食管癌中的表达及生物学功能研究

发布时间：2017-12-21 15:16

  本文关键词：抗氧化蛋白Prdx6在食管癌中的表达及生物学功能研究　出处：《苏州大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:Perociredoxin6(Prdx6)是体内重要的抗氧化蛋白酶,其在食管癌中的表达情况未见报道。本研究旨在探讨抗氧化蛋白Prdx6在人食管癌组织中的表达;构建上调和下调Prdx6表达的病毒并感染人食管癌细胞;探究Prdx6及联合X射线对食管癌细胞生物学功能的影响及机制;在裸鼠体内验证Prdx6对肿瘤生长的影响。方法:免疫组化检测Prdx6正常食管上皮组织、癌旁组织及食管癌组织中的表达,并通过体内、体外实验研究Prdx6对食管癌生物学功能的影响。体外实验:(1)构建下调和过表达Prdx6的病毒并感染Eca-109和TE-1细胞,用Western blot法验证表达效果;(2)通过DCFH-DA染色检测Prdx6及联合X射线作用后Eca-109细胞内ROS水平;(3)利用流式细胞计数法测定Prdx6及联合X射线作用后Eca-109细胞凋亡率的变化;(4)MTT实验、EdU细胞增殖检测实验及克隆形成实验检测Prdx6对Eca-109和TE-1细胞增殖能力的改变,Western blot方法检测Prdx6与p-Erk1/2表达的相关性;(5)细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测Prdx6对Eca-109细胞侵袭迁移能力的影响,并用Western blot方法检测了p-Akt、p-Erk1/2、MMP9及MMP2蛋白的表达情况。体内实验:裸鼠皮下建立人食管癌移植瘤模型,按实验要求分组,测量肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤生长抑制率及增殖率;Western blot方法及免疫组化验证移植瘤组织中Prdx6的表达并检测增殖指标Ki67表达水平的变化。结果:Prdx6在食管癌组织中的表达明显高于正常食管上皮组织和癌旁组织,Prdx6与Ki67、PCNA、CyclinD1的表达具有一致性,与Ki67的表达具有相关性。体外实验:(1)成功构建下调Prdx6的慢病毒和过表达Prdx6的腺病毒并感染食管癌细胞,通过Western blot法验证表达效果,蛋白抑制率80%,过表达效率50%,筛选Prdx6-sh2、Prdx6-sh3慢病毒及Prdx6过表达腺病毒(Ad-Prdx6)用于后续实验。(2)DCFH-DA染色表明,下调Prdx6能够降低Eca-109细胞的ROS清除能力,过表达Prdx6可以增加Eca-109细胞对ROS的清除能力;联合X射线作用后,Prdx6对ROS的清除能力增加。(3)下调Prdx6明显增加细胞的凋亡率,过表达Prdx6明显降低细胞的凋亡率;联合X射线作用后,下调Prdx6能够促进辐射诱导的凋亡,但过表达Prdx6对辐射诱导的凋亡无显著影响。(4)下调Prdx6明显抑制细胞的增殖,过表达Prdx6促进细胞的增殖;Western blot结果显示Prdx6与p-Erk1/2之间存在相互作用。(5)下调Prdx6显著降低Eca-109细胞的侵袭及迁移能力,过表达Prdx6显著增加Eca-109细胞的侵袭及迁移能力;P-Akt、p-Erk1/2及MMP2的表达与Prdx6表达变化一致,表明p-Akt和p-Erk1/2调控下游效应分子MMP2的表达,可能与Prdx6对Eca-109细胞的侵袭和迁移能力的影响有关。体内实验结果:成功构建Eca-109细胞的裸鼠移植瘤模型,实验过程中裸鼠体重无明显变化;下调Prdx6明显抑制移植瘤的生长,过表达Prdx6明显促进移植瘤的生长。结论:Prdx6及增殖相关蛋白在食管癌组织中高表达,Prdx6与Ki67的表达具有一致性及相关性;Prdx6能够明显对食管癌细胞的ROS清除能力、凋亡率、细胞增殖及细胞侵袭迁移能力等多种生物学功能产生影响。联合X射线作后,下调Prdx6会降低细胞的ROS清除能力,增加辐射诱导的细胞凋亡率;在动物体内验证了Prdx6对裸鼠移植瘤增殖能力的影响。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.1

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本文编号：1316177