骨髓间充质干细胞分泌的exosomes在白血病细胞耐药性中的作用研究
本文关键词：骨髓间充质干细胞分泌的exosomes在白血病细胞耐药性中的作用研究 出处：《山东大学》2016年硕士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】：背景：急性淋巴细胞白血病是儿童时期最常见的血液系统恶性肿瘤,近年来,急性淋巴细胞白血病的治疗已取得很大进展,但仍有部分患儿化疗效果差或是缓解后复发,造成该现象最重要的原因之一是白血病细胞对化疗药物产生耐药性。Exosomes是活细胞分泌的微小囊泡,它在血液疾病的发生发展过程中发挥着重要作用,近年来已成为研究热点。研究目的：1.提取骨髓间充质干细胞(BMSCs)分泌的exosomes、并对其进行形态和表面分子鉴定。2.将急性B系淋巴细胞白血病细胞系Nalm-6和exosomes共培养,检测exosomes对Nalm-6细胞增殖活性、凋亡以及细胞周期的影响,探讨exosomes对白血病细胞耐药性的影响及发挥作用的可能机制。研究方法：1.使用无血清培养基培养BMSCs,然后收集培养上清,采用超速离心方法(300g10min、2,000g20min、10,000g30min、100,000gl2h)提取BMSCs分泌的exosomes,采用透射电镜对其进行形态和大小鉴定,使用western blot方法验证其表面分子的表达,采用miRNA芯片方法检测内含miRNA。2.使用CCK-8方法检测BMSCs来源的exosomes对Nalm-6细胞增殖活性的影响。3.采用细胞凋亡试剂盒和流式细胞术检测BMSCs来源的exosomes对Nalm-6细胞凋亡的影响。4.使用PI染色和流式细胞术检测BMSCs来源的exosomes对Nalm-6细胞周期的影响。5. Western blot方法检测BMSCs来源的exosomes对Nalm-6细胞中凋亡相关蛋白表达水平的影响。研究结果：1.采用超速离心方法,从BMSCs培养上清中提取出exosomes,透射电镜下exosomes呈典型的杯状小体,直径在50-150 nm;; western blot结果显示,exosomes表达CD63和HSP70；芯片结果显示exosomes富含多种miRNA。2. Exosomes能够增加Nalm-6细胞的增殖活性,减少VP16诱导的细胞凋亡,增加活细胞比例,促进细胞周期进程,进而诱导白血病细胞耐药的产生。3. Exosomes能够阻断VP16引起的Nalm-6细胞中凋亡相关蛋白BCL-2、全长caspase-3和全长PARP的表达下降,降低BAX、cleaved caspase-3和cleaved PARP的表达。结论：1.采用超速离心方法成功从BMSCs条件培养基中提取出exosomes; 且 exosomes内含多种miRNA。2. Exosomes可能通过影响凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、caspase-3和PARP等的表达来调节Nalm-6细胞的增殖活性、凋亡和周期,进而诱导白血病细胞产生耐药性。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.7
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，本文编号：1330925
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