纳米活性炭吸附丝裂霉素对人肝癌Huh

发布时间：2016-10-08 21:23

  本文关键词：纳米活性炭吸附丝裂霉素对人肝癌Huh-7肿瘤干细胞抑制作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

《吉林大学》 2013年

纳米活性炭吸附丝裂霉素对人肝癌Huh-7肿瘤干细胞抑制作用的研究

宋东颖  

【摘要】：实验目的： 本研究旨在制备出质量可控的ACNP药物载体，并在体外研究纳米活性炭吸附丝裂霉素C（CBMC）、丝裂霉素C（MMC）、纳米活性炭（ACNP）对于人肝癌Huh-7肿瘤细胞和Huh-7肿瘤干细胞的抑制效果，并相互比较，探究ACNP作为抗肿瘤药物载体治疗肿瘤的可行性。 实验方法： 1.将购买的医用活性炭用球磨机球磨，再将球磨后的活性炭用含有双蒸水的自制沉降缸沉降，获取适当高度范围内的活性炭，进行冷冻干燥得到ACNP粉末，并利用透射电镜（TEM）以及原子力显微镜（AFM）测定其粒径和形态。 2.制备MMC的标准溶液后在其最大吸收峰364nm处测定吸光度值，并绘制MMC的标准曲线。将ACNP与MMC以一定比例混合后分成相同的8个组别，利用超声振荡法使MMC吸附至ACNP上，在振荡至5、10、15、20、25、30、35及40分钟时分别取一个组别的混合物，高速离心使ACNP沉淀，测定上清液的吸光度值，利用上述MMC标准曲线测定上清中游离MMC的含量，并进一步推算出吸附至ACNP上的MMC含量，根据确定ACNP吸附MMC的最佳时间。再将ACNP和MMC以不同比例配比，超声振荡30分钟，每个不同配比组别均高速离心使ACNP沉淀，测定上清液的吸光度值，利用上述MMC标准曲线测定上清中游离MMC的含量，并进一步推算出吸附至ACNP上的MMC含量，，根据结果算出吸附等温式，最终计算出ACNP吸附MMC的饱和吸附量，并确定两种成分的最佳吸附比例，之后的实验将以此比例制备标准化的CBMC。 3.利用CD133-PE抗体筛选人肝癌Huh-7细胞系中表达CD133表面抗原的肿瘤干细胞，用含20ng/ml的EGF、20ng/ml的bFGF和2%B27的无血清DMEM/F12培养基进行培养。后对分选出来的肿瘤干细胞采用肿瘤干细胞诱导分化实验、生长增殖曲线实验、表面标志物鉴定实验、软琼脂克隆形成实验及免疫缺陷小鼠（NOD/SCID小鼠）体内成瘤实验等鉴定方法进行鉴定。 4.在含有160μl密度为5×106个/ml的Huh-7肿瘤细胞和Huh-7肿瘤干细胞的96孔板中，加入MMC、ACNP、CBMC等三个药物组别，且每个组别设2.5、5、10、20、40、80μg/ml六个浓度组，加入后孵育24小时，利用CCK-8试剂盒测定不同浓度的，不同药物对于Huh-7肿瘤细胞和Huh-7肿瘤干细胞的抑制作用。 实验结果： 1.悬浮沉降法制备出来的ACNP溶液，经过冻干后获得黑色絮状的ACNP粉末。利用AFM与TEM测定其表征的结果显示，自制ACNP为近似球形，表面光滑，粒径均匀，大小为89.93±12.63nm。且该方法制备出来的不同批次的ACNP形状及质量非常稳定。 2.测定出的MMC标准曲线方程为为D=0.00213+0.06942×C （R=0.9996，P0.0001)；ACNP吸附MMC的最佳吸附时间为30分钟；Langmuir吸附等温方程为C/X=1.75048+0.0079×C （R=0.98236，P0.0001），并由此方程计算出ACNP吸附MMC的饱和吸附量为126.58mg/g，因此之后实验中配制CBMC时采用的MMC与ACNP配制比例为1:8。 3.采用流式细胞分选法，从人肝癌Huh-7细胞系中分选出了所占比例为5.18%的CD133+的肿瘤细胞，用包含20ng/ml EGF、20ng/ml bFGF和2%B27的DMEM/F12培养基继续培养。分选出来的细胞中CD133+肿瘤干细胞比例高达92.81%；将分选后培养成球的Huh-7肿瘤干细胞在含血清的DMEM/F12培养基条件下培养，进行诱导分化可发现肿瘤干细胞迅速贴壁、分化，在48～72小时时肿瘤干细胞球完全贴壁、消失，形成与人肝癌Huh-7细胞系一样的单层肿瘤细胞；而肿瘤干细胞生长增殖曲线和软琼脂克隆形成实验则显示，分选出的CD133+肿瘤干细胞较其它非肿瘤干细胞具有更高的增殖活性，结果具有统计学意义；在NOD/SCID小鼠体内成瘤实验中分选出CD133+肿瘤干细胞的成瘤率为57%，而Huh-7肿瘤细胞的成瘤率为0，两种细胞致瘤能力有显著性差异，即CD133+的肿瘤干细胞较Huh-7肿瘤细胞具有高度的致瘤性。 4.将终浓度为2.5、5、10、20、40、80μg/ml的MMC、ACNP和CBMC分别施用于人肝癌Huh-7肿瘤细胞和Huh-7肿瘤干细胞后根据结果可计算出MMC和CBMC对于抑制Huh-7肿瘤细胞的IC50值分别为10.28μg/ml、4.822μg/ml，而对于Huh-7肿瘤干细胞的IC50值分别为132.078μg/ml、56.83μg/ml。结果显示ACNP在各个剂量下对于Huh-7肿瘤细胞及Huh-7肿瘤干细胞均不具有抑制生长作用。MMC和CBMC在各个剂量下对于Huh-7肿瘤干细胞的抑制率均显著低于Huh-7肿瘤细胞，结果具有统计学意义，且随着剂量的增加其抑制率呈现增强的趋势。CBMC在各个剂量下对于Huh-7肿瘤细胞及Huh-7肿瘤干细胞的抑制率均显著高于单独使用的MMC和ACNP，即MMC将ACNP作为载体后可以有效提高对于肿瘤细胞及肿瘤干细胞的抑制率，结果具有统计学意义，且随着剂量的增加其抑制率呈现增强的趋势。 结论： 1.本研究获得了质量稳定、可控的，粒径大小为89.93±12.63nm的ACNP。 2.制备的ACNP吸附MMC的饱和吸附量为126.58mg/g，与MMC的最佳吸附比例为8:1，最佳吸附时间为30分钟。 3.成功从人肝癌Huh-7细胞系中分选出了CD133+的Huh-7肿瘤细胞，分选后CD133+的Huh-7肿瘤细胞的纯度可达到92.81%，且通过肿瘤干细胞诱导分化实验、生长增殖曲线实验、软琼脂克隆形成实验、表面标志物鉴定实验和体内成瘤实验等鉴定方法对其进行鉴定，确认分选出的细胞为Huh-7肿瘤干细胞。 4. MMC、CBMC在各个剂量下对于Huh-7肿瘤干细胞的抑制率均显著低于Huh-7肿瘤细胞，且随着剂量的增加其抑制率呈现增强的趋势，结果具有统计学意义。 5. CBMC在各个剂量下对于Huh-7肿瘤细胞及Huh-7肿瘤干细胞的抑制率均显著高于单独使用的MMC和ACNP，即MMC将ACNP作为载体后可以有效提高对于肿瘤细胞及肿瘤干细胞的抑制率，且随着剂量的增加其抑制率呈现增强的趋势，结果具有统计学意义。 6. ACNP在各个剂量下对于Huh-7肿瘤细胞及Huh-7肿瘤干细胞均不具有抑制生长作用。

【关键词】：
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R735.7
【目录】：

下载全文 更多同类文献

CAJ全文下载

(如何获取全文？ 欢迎：购买知网充值卡、在线充值、在线咨询)

CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 张燕萍,黄允宁;活性炭-丝裂霉素复合物经内镜注射在胃癌治疗中的应用[J];临床荟萃;2001年24期

2 欧阳雪晖;欧阳墉;张学军;;纳米材料/技术及其在医学中的应用[J];介入放射学杂志;2012年07期

3 张浩;张英鸽;;纳米药物与肿瘤转移的种子-土壤学说[J];生物技术通讯;2010年06期

4 巩艳青;辛钟成;郭应禄;;肿瘤干细胞表面标记物的研究进展[J];中华临床医师杂志(电子版);2010年11期

5 宋东颖;王毅;孙岚;张英鸽;;肿瘤干细胞理论及肿瘤干细胞分离和鉴定研究进展[J];中国药理学与毒理学杂志;2012年05期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 江庆萍;姚开泰;;鼻咽癌细胞株中标记滞留细胞(LRGs)的建立与检测(英文)[J];癌症;2010年05期

2 于锋;张群慧;;喉鳞状细胞癌干细胞的BrdU标记鉴定[J];中国耳鼻咽喉头颈外科;2011年08期

3 嵇玉蓉;魏勉;张晓梅;;生物可降解纳米载药缓释宫内节育系统的构建及应用前景[J];中国医药导刊;2012年12期

4 蒋东辉;张月飞;;鼻咽癌干细胞的研究进展[J];广东医学;2013年07期

5 杨柯柯;申聪香;文忠;关小芳;赖肖芬;钱宇虹;;hTERTp/TK/pGL3靶向抑制端粒酶活性及其对鼻咽癌干细胞的杀伤作用[J];吉林大学学报(医学版);2013年03期

6 高声传;宗文涛;;纳米活性炭在癌症治疗中的应用进展[J];解放军药学学报;2010年04期

7 关小芳;文忠;申聪香;牟少凤;张宏征;谢民强;郭梦和;;人鼻咽癌细胞株中类肿瘤干细胞的分离、培养及鉴定[J];解放军医学杂志;2008年12期

8 张浩;孙岚;鄂晓;曲秋莲;姜爽;张英鸽;;纳米活性炭吸附丝裂霉素C腹腔化疗的生物发光成像研究[J];军事医学;2011年04期

9 申聪香;文忠;钱宇虹;牟少凤;关小芳;;鼻咽癌细胞中增强型表达载体调控TK基因与端粒酶活性关系的研究[J];临床耳鼻咽喉头颈外科杂志;2010年04期

10 曾钟波;活性炭的临床应用[J];实用临床医学;2004年02期

中国博士学位论文全文数据库 前5条

1 刘岩;喉癌侧群细胞生物学特性的研究[D];吉林大学;2011年

2 宋舟;Sonic hedgehog信号通路在干样胃癌细胞中的作用[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年

3 吴爱兵;ALDH1可作为鼻咽癌干细胞功能性标记物和临床预后的指标[D];南方医科大学;2011年

4 江庆萍;鼻咽癌中肿瘤干细胞[D];南方医科大学;2008年

5 何炜;干细胞因子OCT4、SOX2和HIWI在食管鳞癌中的表达及OCT4对食管癌生物学行为的影响[D];郑州大学;2009年

中国硕士学位论文全文数据库 前7条

1 张焕荣;非小细胞肺癌中ERBB3 mRNA表达的临床病理意义[D];广州医学院;2011年

2 张群慧;小鼠喉粘膜和喉肿瘤的标记滞留细胞鉴定[D];广州医学院;2011年

3 张浩;淋巴靶向抗癌药物卡波霉素载体制备方法优化及药效研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年

4 邱际华;鼻咽癌细胞株中CD133阳性细胞的分离与功能分析[D];南方医科大学;2009年

5 关小芳;端粒酶催化亚单位启动子（hTERTp）调控胸腺嘧啶脱氧核苷激酶基因（TK）靶向性杀伤鼻咽癌细胞中CD133~+细胞的实验研究[D];南方医科大学;2009年

6 焦锋;鼻咽癌细胞系5-8F中SP亚群的检测及其生物学功能的分析[D];南方医科大学;2010年

7 周滋霞;无水乙醇灭活术中器械携带肿瘤脱落细胞效果的实验研究[D];南京医科大学;2012年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘立柱;马红杰;朱兴松;金镇镐;樊渝江;;聚乳酸/纳米二氧化硅原位复合材料的制备和性能[J];北京化工大学学报(自然科学版);2008年01期

2 袁亮;邹利光;;磁性纳米粒子肿瘤分子成像研究及进展[J];放射学实践;2012年03期

3 张文钲,王广文;纳米银抗菌材料研发现状[J];化工新型材料;2003年02期

4 路琴;张静;何春霞;;纳米SiO_2对工程塑料改性的研究进展[J];化工新型材料;2008年04期

5 董生;袁正;吴胜伟;李文新;;放射性覆膜金属支架制备方法的研究[J];介入放射学杂志;2010年12期

6 赵钢;朱伟;陆志刚;马士新;和亚萍;魏盟;;载有匹伐他汀的纳米涂层支架的研究[J];介入放射学杂志;2012年06期

7 朱友良,裴建云;无机纳米粒子填充改性聚四氟乙烯复合材料的研究[J];塑料工业;2005年05期

8 黄海力;王孟薇;;肿瘤浸润转移分子机制的研究进展[J];生物技术通讯;2006年01期

9 于皆平，张祖民;胃癌的内镜治疗[J];中国实用内科杂志;1996年07期

10 蔡水洲,夏先平,谢长生;载铜宫内节育器(IUD)及其腐蚀的研究[J];生殖与避孕;2004年05期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 宁武;;肿瘤干细胞的潜在作用[J];国际药学研究杂志;2008年02期

2 王小利;任军;;肿瘤干细胞与肿瘤治疗的新靶点[J];药物与人;2008年04期

3 ;仁济医院首次成功分离卵巢癌干细胞[J];上海交通大学学报(医学版);2008年08期

4 彭力,姚开泰;肿瘤干细胞研究进展[J];国际肿瘤学杂志;1986年05期

5 彭力;姚开泰;;抗癌药物杀伤瘤细胞群体和干细胞的研究(摘要)[J];肿瘤学杂志;1987年S1期

6 冯波,刘炳亚,陆爱国,郑民华;肿瘤干细胞与实体肿瘤[J];世界华人消化杂志;2004年04期

7 彭广新;李大鹏;;肿瘤干细胞与恶性肿瘤的靶向治疗[J];中国肿瘤临床;2006年07期

8 刘虹麟;娄晋宁;;肿瘤干细胞生物学特性的研究进展[J];医学研究杂志;2009年06期

9 孙建聪;连其周;夏建川;;肿瘤干细胞研究进展[J];中华肿瘤防治杂志;2009年24期

10 崔永;;肺癌干细胞学说的证据和假设[J];中国肿瘤;2010年11期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 金润铭;;肿瘤干细胞及其生物学特点[A];基因开启未来：新时代的遗传学与科技进步——湖北省遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2009年

2 魏湲颜;江建海;;N-糖链在肿瘤干细胞中的功能和调控[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年

3 张宏权;;肿瘤干细胞与肿瘤的侵袭与转移[A];第九届全国肿瘤转移学术大会暨2011年黑龙江省医学会肿瘤学年会报告集[C];2011年

4 曲学彬;李晶;赵春华;;慢性粒细胞白血病肿瘤干细胞的免疫调节功能[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年

5 全军民;汪静;卢菲;任骐;叶涛;张慧;;肿瘤干细胞特异性靶标的发现及小分子抑制剂的研究[A];中国化学会第28届学术年会第3分会场摘要集[C];2012年

6 姚晨;;肝癌与肝肿瘤干细胞的研究进展(综述)[A];天津市生物医学工程学会第29届学术年会暨首届生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2009年

7 王欣荣;单保恩;艾军;刘月彩;张超;张海谱;;无血清悬浮培养法富集小鼠乳腺癌系4T1中肿瘤干细胞的初步研究[A];河北省免疫学会第六次免疫学大会资料汇编[C];2010年

8 李海英;贺晓;陶虹;郭克;冯丹妮;白洁;扈启宽;;甲基化抑制剂对肿瘤干细胞自我复制和致瘤性的影响[A];第八届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2011年

9 葛丽丽;杨小昂;;肝癌细胞系Huh-7中EpCAM+细胞亚群的肿瘤干细胞样特性[A];中华医学会肿瘤学分会第七届全国中青年肿瘤学术会议——中华医学会肿瘤学分会“中华肿瘤 明日之星”大型评选活动暨中青年委员全国遴选论文汇编[C];2011年

10 余茜颖;郭黎平;陆士新;;miR-203调控食管癌干细胞自我更新的研究[A];全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集[C];2011年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 记者 杨帆　实习生 杨周;[N];重庆日报;2009年

2 何雷;[N];健康报;2009年

3 衣晓峰　蓝建中;[N];医药经济报;2010年

4 记者 衣晓峰　靳万庆;[N];中国中医药报;2010年

5 衣晓峰;[N];中国医药报;2010年

6 吕斌;[N];医药导报(中药报);2004年

7 香港麦迪信医学出版有限公司供稿;[N];医药经济报;2003年

8 上海交通大学附属仁济医院副院长 陈芳源;[N];健康报;2010年

9 胡卫娜;[N];科技日报;2011年

10 高凡;[N];科学导报;2009年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 谢国柱;通过对肿瘤细胞致瘤潜能及上皮—间充质转化的研究探讨肿瘤干细胞假说的本质[D];南方医科大学;2012年

2 马波;人视网膜母细胞瘤肿瘤干细胞的分离鉴定及相关表面标志的初步研究[D];复旦大学;2011年

3 刘虹麟;肿瘤干细胞向不同肿瘤细胞分化的实验研究[D];中国协和医科大学;2009年

4 邹游;周期诱导联合化疗后耐药肿瘤细胞亚群与肿瘤干细胞相关性的研究[D];华中科技大学;2011年

5 吴国民;口腔鳞状细胞癌肿瘤干细胞的分选和鉴定[D];吉林大学;2011年

6 黄名威;乳腺癌MCF7细胞株中肿瘤干细胞的增殖及相关蛋白研究[D];广西医科大学;2010年

7 贾勇圣;Oct4对肿瘤干细胞成瘤能力和多向分化潜能的影响[D];北京协和医学院;2011年

8 李锋;肿瘤干细胞标记物检测对Ⅰ期肺癌患者术后复发的预测价值及机制学研究[D];浙江大学;2011年

9 葛彦;干细胞样脑胶质瘤细胞株的建立及CD40信号对肿瘤干细胞生物学行为的作用机制[D];苏州大学;2011年

10 宫安静;肿瘤干细胞致敏的树突状细胞对脑胶质瘤免疫作用研究[D];山东大学;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 保秋萍;多发性骨髓瘤U266细胞株中肿瘤干细胞的分离及生物学特性的初步研究[D];昆明医学院;2011年

2 宋东颖;纳米活性炭吸附丝裂霉素对人肝癌Huh-7肿瘤干细胞抑制作用的研究[D];吉林大学;2013年

3 陈坤;人喉癌细胞系Hep-2中的肿瘤干细胞与放疗抵抗关系的初步研究[D];河北医科大学;2010年

4 焦洁;人卵巢癌CD24-表型细胞的干细胞特征及上皮-间质转变的体外研究[D];浙江大学;2011年

5 孙晓彤;胃癌中肿瘤干细胞标志物的初步鉴定、表达及其临床病理学意义[D];兰州大学;2010年

6 黄稳定;肿瘤干细胞标志物CD133及胚胎干细胞Oct4在肺癌脊柱转移肿瘤组织中的表达及意义[D];第二军医大学;2010年

7 陈炬莹;乳腺癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群的初步研究[D];福建医科大学;2010年

8 王建鹏;Notch-1基因下调诱导GBM肿瘤干细胞肿瘤细胞凋亡的试验研究[D];青岛大学;2010年

9 安勇;体外吉西他滨筛选富集人胰腺癌细胞株SW1990肿瘤干细胞的研究[D];南京医科大学;2010年

10 王蒙;原发性乳腺癌患者循环肿瘤细胞及肿瘤干细胞的检测及临床意义[D];河北医科大学;2011年

  本文关键词：纳米活性炭吸附丝裂霉素对人肝癌Huh-7肿瘤干细胞抑制作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：134328