趋化因子受体CCR7在乳腺癌转移过程中的研究

发布时间：2018-02-28 11:20

  本文关键词： CCR7乳腺癌 RNA干扰 细胞生长 细胞转移　出处：《昆明医科大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的： 本实验利用RNA干扰技术,以乳腺癌细胞为研究对象,下调乳腺癌细胞系中的CCR7基因的表达,研究CCR7在乳腺癌体外体内生长、迁移、侵袭和转移过程中所发挥的生物学作用。方法：1、常规培养乳腺癌细胞系MDA-MB-231、4T1-luc、MDA-MB-361、T47D、 MDA-MB-468、MCF-7、MCF10A、184B5、184A1、HCC1806、HCC1937、HCC1580、 MCF10A,用Western blotting方法筛选CCR7高表达的乳腺癌细胞系。2、shRNA沉默CCR7的表达。通过基因设计网站,选择CCR7-shRNA序列,设计实验组和对照组。合成shRNA并对CCR7高表达细胞进行转染。用RT-PCR方法检测CCR7-shRNA的对细胞中CCR7的沉默效果。通过嘌呤霉素筛选稳定表达CCR7-shRNA的乳腺癌细胞株。提取实验组和对照组的mRNA, RT-PCR方法检测干扰效果。 3、通过SRB实验来检测稳定沉默CCR7对乳腺癌细胞株增殖能力的影响。4、通过细胞划痕实验来检测稳定沉默CCR7对乳腺癌细胞株迁移能力的影响。5、通过Transwell实验来检测稳定沉默CCR7对乳腺癌细胞株侵袭能力的影响。6、通过小动物活体成像和病理实验方法来检测稳定沉默CCR7乳腺癌细胞株对BALB/c小鼠体内乳腺癌移植瘤生长和转移的影响结果：1、筛选CCR7高表达的乳腺癌细胞系的Western blot结果显示：CCR7在小鼠乳腺癌细胞株4T1-Luc中高表达,在部分乳腺癌细胞株中如MB231、T47D、 MB468、MCF7、HCC1937中有较高水平的表达。但是在正常乳腺细胞株如18485、184A1和MCF10A中几乎检测不到CCR7表达。最后我们选取4T1-1uc乳腺癌细胞进行后续的实验。2、4T1-luc细胞在经过shRNA处理后,通过RT-PCR检测对4T1-1uc乳腺癌细胞的沉默效应,结果显示CCR7-shRNA C#和CCR7-shRNA D#能非常有效地抑制4T1-1uc细胞中内源性CCR7的mRNA水平的表达。3、经细胞增殖实验结果显示：实验组4T1-luc-CCR7-shRNA C#和4T1-luc-CCR7-shRNA D#细胞的增殖速度较显著的低于4T1-luc-ShLacz细胞增殖速度。4、经细胞划痕实验结果显示：对照组4T1-luc-ShLacz细胞划痕的愈合所需要的时间较明显快于实验组4T1-luc-CCR7-shRNA C#和4T1-luc-CCR7-shRNA D#细胞的愈合所需要的时间。5、经细胞侵袭实验结果显示：侵袭到下室的实验组4T1-luc-CCR7-shRNA C#和4T1-luc-CCR7-shRNA D#细胞数目比对照组4T1-luc-ShLacz细胞显著降低。6、小鼠乳腺癌移植瘤动物模型及小鼠活体成像结果显示：实验组CCR7-shRNA C#细胞皮下注射的小鼠与对照组ShLacz4T1-luc细胞皮下注射组相比,乳腺癌移植瘤生长和转移明显受到抑制。结论：通过RNA干扰技术可以有效下调乳腺癌细胞中CCR7基因的表达。CCR7表达的下调不仅抑制了乳腺癌细胞4T1-1uc体外的增殖、迁移以及侵袭活性,而且在小鼠乳腺癌移植瘤动物模型中乳腺癌移植瘤生长和转移也明显受到抑制。这对临床预测乳腺癌转移的早期诊断有一定的意义,并可能成为临床治疗乳腺癌转移的新的靶点。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9

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本文编号：1547079