Snail介导的上皮—间质转化在鼻咽癌放射抵抗中的作用

发布时间：2018-03-01 01:16

  本文关键词： Snail 上皮-间质转化 鼻咽癌 侵袭迁移 Snail 鼻咽癌 放射抵抗 EGFR DNA-PKcs DNA损伤修复 Snail 鼻咽癌 裸鼠皮下成瘤 放射治疗 放疗抵抗　出处：《华中科技大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：第一部分Snail对人鼻咽癌细胞上皮-间质转化特性的影响 目的：构建Snail过表达鼻咽癌细胞系,验证其在体外对鼻咽癌细胞侵袭、转移的影响。 方法：Western blot实验检测CNE-1、CNE-2、HNE-1细胞中Snail、E-cadherin蛋白的表达水平;利用过表达Snail的慢病毒载体转染人鼻咽癌细胞系;Real-time PCR及Western blot检测Snail及EMT相关蛋白表达变化；免疫荧光实验检测EMT标志蛋白的细胞表达定位；细胞划痕及Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力变化。 结果：人鼻咽癌低分化细胞系HNE-1及CNE-2中Snail表达量较CNE-2降低；经Real-time PCR及Western blot实验分别鉴定慢病毒转染后的人鼻咽癌HNE-1和CNE-2细胞系,Snail mRNA及蛋白表达量均较空载体转染组及未转染对照组升高,Snail过表达稳定转染鼻咽癌细胞系构建成功；进一步行Western blot实验表明：Snail过表达组细胞E-cadherin表达下降,Vimentin、N-cadherin和MMP-2表达上升；免疫荧光实验显示：Snail表达上调后,细胞与细胞之间E-cadherin蛋白表达缺失,胞浆内Vimentin蛋白表达升高；侵袭和迁移实验显示：上调Snail后鼻咽癌细胞侵袭和迁移能力较空载体对照组增强：差异均具有统计学意义(P0.01)。 结论：特异性上调Snail表达,能够诱导鼻咽癌细胞获得EMT样特性,增加其体外迁移侵袭能力。 第二部分Snail对人鼻咽癌细胞放射敏感性的影响 目的：探讨上调Snail对鼻咽癌细胞系放射敏感性的作用及机制。 方法：克隆形成实验检测射线照射后的细胞克隆形成率,绘制剂量存活曲线,计算相关放射生物学参数；细胞凋亡实验检测射线照射后48h、72h的细胞凋亡率；免疫荧光实验检测射线照射后,细胞核内残留γ-H2AX荧光焦点数量；Western blot实验分别检测射线照射后核内γ-H2AX、p-EGFR、p-DNA-PKcs蛋白表达变化。 结果：梯度剂量射线照射后,Snail过表达组鼻咽癌细胞系克隆形成率增加,根据单击多靶模型得出SF2、D0、Dq、N值均显著高于其空载体对照组细胞；射线照射后48h和72h细胞凋亡率均较空载体对照组显著下降：免疫荧光实验提示射线照射后Snail过表达组核内残留γ-H2A荧光焦点数较空载体对照组减少,Western blot显示γ-H2AX持续时间较空载体对照组缩短;Snail表达上调后,EGFR入核增加,p-EGFR、 p-DNA-PKcs表达增加,差异均具有统计学意义(P0.05) 结论：上调Snail诱导射线照射后核内γ-H2AX残留时间缩短,促进鼻咽癌细胞p-EGFR及p-DNA-PKcs表达增加,DNA损伤修复增加,最终诱导鼻咽癌细胞产生放射抵抗。 第三部分Snail诱导鼻咽癌放射抵抗的体内研究 目的：通过体内实验验证Snail诱导鼻咽癌细胞放射敏感性降低。 方法：分别建立CNE-2-Snail、CNE-2-vector裸鼠皮下移植瘤模型,在动物水平观察移植瘤平均出瘤时间,并观察给予10Gy射线照射后肿瘤体积变化,免疫组化实验检测鼻咽癌皮下移植瘤组织EMT、血管生成、凋亡等生物学特性的变化。 结果：裸鼠皮下移植瘤模型结果显示：Snail过表达组平均出瘤时间快于空载体转染组,成瘤体积显著大于空载体转染组；给予10Gy射线照射后,两组肿瘤体积、增殖速度显著受到抑制,其中空载体转染组肿瘤体积无明显增大,Snail过表达组肿瘤倍增速度减慢;免疫组化实验提示：Snail过表达组的Snail棕色染色较空载体转染组增加,胞内可见Vimentin棕色染色,空载体转染组细胞间隙可见E-cadherin棕色染色,Snail过表达组E-cadherin表达缺失。给予射线照射后各组皮下移植瘤组织内caspase-3棕色染色均增加,空载体转染组较Snail过表达组进一步升高。与此同时,射线诱导各组VEGF表达下降,而空载体转染组较Snail过表达组下降更为显著。 结论：上调Snail表达水平后,鼻咽癌细胞皮下移植瘤成瘤速度加快,肿瘤组织表现出间质样细胞特性,并能进一步诱导射线照射后的细胞凋亡减少,移植瘤放射敏感性降低。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.63

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本文编号：1549775