TRAF2和RIP1介导的JNK激活诱导的自噬存活通路降低TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的

发布时间：2016-11-03 14:34

  本文关键词：TRAF2和RIP1介导的JNK激活诱导的自噬存活通路降低TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

《重庆医科大学》 2013年

TRAF2和RIP1介导的JNK激活诱导的自噬存活通路降低TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究

何卫阳  

【摘要】：目的： 本课题以体外培养的多种肿瘤细胞为研究对象,通过TRAIL进行干预，观察TRAIL能否诱导肿瘤细胞自噬以及自噬在TRAIL诱导肿瘤细胞自噬中的作用，从细胞信号传导通路及蛋白水平探讨TRAIL诱导自噬以及自噬对不同肿瘤细胞增殖、凋亡影响的作用机制。为增强TRAIL的疗效以及逆转TRAIL的耐药肿瘤奠定实验理论基础。 方法： 应用TRAIL处理体外培养的UM-UC-3、A549以及PC-3，然后应用LDH检测TRAIL细胞毒性，应用Western blot检测自噬相关蛋白表达变化，通过荧光显微镜检测自噬体的变化明确TRAIL能否诱导自噬。然后应用自噬抑制剂WTM、CQ以及沉默自噬关键基因ATG7以及Beclin-1抑制自噬观察对TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的影响，探明自噬在TRAIL诱导凋亡中的作用。应用Western blot检测凋亡信号通路蛋白Caspase8、Caspase3以及PARP的变化；应用自噬抑制剂CQ抑制自噬检测对TRAIL诱导死亡复合体的影响，应用GST Pull Down检测死亡复合体蛋白Caspase8、FADD以及RIP1表达的变化，明确自噬对凋亡和死亡复合体的影响。应用JNK抑制剂SP、NF-kB抑制剂IKK2Inhibitor抑制JNK及NF-kB信号通路，观察其对自噬以及TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的影响，应用Western blot检测自噬相关蛋白LC-3B以及凋亡信号通路蛋白Caspase8、Caspase3以及PARP的变化，探明调节自噬的信号通路。应用TRAIL处理体外培养的肿瘤细胞UM-UC-3以及A549，然后应用Western blot检测Bcl-2家族蛋白的表达，通过免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）检测Beclin1-Bcl2/Bcl-xl复合体的变化；以及抑制JNK和NF-kB通路对上述蛋白变化的影响，明确TRAIL诱导自噬的可能机制。应用JNK抑制剂SP、自噬抑制剂WTM抑制JNK及自噬信号通路，然后应用Western blot检测对抗凋亡蛋白家族表达的影响；然后再应用自噬抑制剂CQ、CathepsinB、溶酶体抑制剂MG-132、凋亡抑制剂z-VAD以及JNK抑制剂SP，观察其对TRAIL诱导的抗凋亡蛋白家族降解的影响，探明自噬对抗凋亡蛋白降解的影响。最后沉默RIP1以及TRAF2，观察其对自噬水平的影响以及对TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的影响，应用LDH检测肿瘤细胞死亡以及应用Western blot检测自噬蛋白LC-3Ⅱ表达的变化，探明JNK激活介导的TRAIL诱导自噬的上游信号通路。 结果： TRAIL可以诱导膀胱肿瘤细胞UM-UC-3、肺癌细胞A549以及前列腺癌细胞PC-3自噬；主要表现为LC-3II表达增加、“自噬潮”的形成以及自噬体的显著增加。TRAIL诱导的自噬对肿瘤细胞起保护作用，无论是应用药物抑制剂3MA、WTM或CQ还是沉默自噬关键基因ATG7或Beclin-1抑制自噬，均能显著增强TRAIL的细胞毒性。自噬可以抑制TRAIL诱导的凋亡信号通路，，抑制自噬可增强TRAIL诱导的细胞凋亡，以及死亡复合体的形成。抑制JNK可以抑制自噬，进而明显增强TRAIL诱导的细胞毒性。TRAIL诱导的自噬主要通过Bcl-xl的降解以及Bcl-xl/Beclin1复合体的分离来实现的；而抑制JNK可以抑制Bcl-xl的降解并可以促进Bcl-xl/Beclin1复合体的重新结合。JNK介导的自噬参与了抗凋亡蛋白的降解，抑制JNK或抑制自噬均能显著促进抗凋亡蛋白cIAP1、cIAP2、XIAP以及c-FLIP的降解。RIP1以及TRAF2调节JNK激活诱导自噬的产生。沉默RIP1以及TRAF2均能有效地抑制自噬，并能显著增强TRAIL诱导的细胞死亡。 结论： TRAIL可以诱导多种肿瘤细胞产生保护性自噬；而RIP1和TRAF2介导的JNK激活是TRAIL诱导自噬的上游信号；Bcl-xl的降解以及Bcl-xl/Beclin1复合体的分离是TRAIL诱导自噬的主要机制。抑制JNK介导的自噬可能是提高肿瘤对TRAIL敏感性的一个新的切入点。

【关键词】：
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R73-36
【目录】：

下载全文 更多同类文献

CAJ全文下载

(如何获取全文？ 欢迎：购买知网充值卡、在线充值、在线咨询)

CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈艾;熊励晶;马骄;童煜;毛萌;;脑源性神经营养因子通过PI3K/Akt/mTOR信号途径对胚鼠缺氧神经元的保护作用[J];中国儿童保健杂志;2013年10期

2 陈松峰;邵增务;;自噬相关信号转导通路研究进展[J];国际骨科学杂志;2013年04期

3 王棋文;胡飞飞;王涛;袁燕;顾建红;刘学忠;卞建春;刘宗平;;镉诱导PC12细胞自噬的形态学观察[J];扬州大学学报(农业与生命科学版);2013年03期

4 肖凌;李兰芳;陈临溪;;自噬对血管功能的影响及与相关疾病的关联研究进展[J];生物化学与生物物理进展;2013年12期

5 李玲;徐小洁;叶棋浓;;细胞自噬与肿瘤[J];中国生物化学与分子生物学报;2013年11期

6 GE Jiao;LIU Yan;LI Qiang;GUO Xia;GU Ling;MA Zhi Gui;ZHU Yi Ping;;Resveratrol Induces Apoptosis and Autophagy in T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia Cells by Inhibiting Akt/mTOR and Activating p38-MAPK[J];Biomedical and Environmental Sciences;2013年11期

7 喻琴琴;杨俊;李馨欣;;自噬及其抑制剂的研究进展[J];实用医学杂志;2013年17期

8 张广宇;王翠琴;彭越;彭涛;贾延劼;;自噬在大鼠骨髓间质干细胞神经分化过程中的作用[J];中国应用生理学杂志;2013年05期

9 李冬;刘秀华;史大卓;;细胞自噬与心血管疾病[J];国际病理科学与临床杂志;2013年05期

10 孟明;梁红格;方皓;周蕾;冯建勇;董阳;闫振;陈冬志;;PI3K/Akt/mTOR通路与自噬在类风湿关节炎滑膜细胞增生中的意义[J];医学研究与教育;2013年05期

中国博士学位论文全文数据库 前7条

1 杨爱民;Neuronostatin对痛觉、胃肠运动和情绪的影响及脂基化蛋白LC3-Ⅱ的半合成[D];兰州大学;2013年

2 张开光;TRAIL对胃癌细胞株SGC7901/VCR耐药基因表达的影响及TRAIL联合顺铂杀伤SGC7901/VCR的研究[D];山东大学;2013年

3 刘赟;调控镊钴基纳米材料及纳米基因载体的自噬效应在肿瘤诊疗中的应用[D];中国科学技术大学;2013年

4 李娜;幽门螺杆菌CagA抑制胃上皮细胞自噬及其感染引起的miR-222/146a上调在胃相关疾病发生中的作用机制研究[D];第三军医大学;2013年

5 杨立靖;抗多发性骨髓瘤细胞的两种新型单体天然药物的分子靶点研究[D];华中科技大学;2013年

6 王亮;活细胞中内吞囊泡和自吞噬囊泡的荧光成像研究[D];华中科技大学;2013年

7 华雯;雷帕霉素与细胞自噬在哮喘气道炎症和嗜酸粒细胞分化中的作用研究[D];浙江大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 李梦姣;蓝萼甲素对人肺癌A549细胞的抑制作用及其机制[D];苏州大学;2013年

2 田一虹;亚精胺诱导Hela细胞自噬与降低细胞活力关系的研究[D];兰州大学;2013年

3 秦真真;自噬相关基因多态性与江苏汉族人群女性乳腺癌遗传易感性的关联研究[D];南京医科大学;2013年

4 王贝贝;伤寒沙门菌质粒对巨噬细胞THP-1自噬、凋亡和炎症反应的影响[D];苏州大学;2013年

5 范俊;血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞自噬的影响及其机制的初步研究[D];第三军医大学;2013年

6 郭树平;白藜芦醇对前列腺癌PC-3细胞自噬影响的实验研究[D];福建医科大学;2013年

7 王凯;冠状病毒木瓜样蛋白酶诱导自噬生物学效应研究[D];安徽医科大学;2013年

8 敬开权;慢性不可预知温和应激对大鼠海马自噬作用和HMGB1/TLR4通路的影响[D];南华大学;2013年

9 宋蕊;白藜芦醇通过mTOR信号通路抑制脂多糖诱导的心肌细胞炎症反应的实验研究[D];昆明医科大学;2013年

10 牛婷;自噬在阿霉素诱导小鼠心肌损伤中的作用机制[D];山东大学;2013年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 韩丽辉,马春红,孙汶生;TRAIL在肿瘤治疗中的研究进展[J];国外医学.肿瘤学分册;2001年03期

2 刘征波;TRAIL系统与细胞凋亡[J];国外医学.生理.病理科学与临床分册;2003年02期

3 马正宇;TNF家族新成员TRAIL及其受体与细胞凋亡[J];国外医学.分子生物学分册;1999年03期

4 韩丽辉;TRAIL抗癌作用的分子机制[J];肿瘤学杂志;2002年02期

5 梁建华;TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡及药物干预研究[J];国外医学.外科学分册;2003年04期

6 庄国洪;以TRAIL为靶点的肿瘤生物治疗研究[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2003年02期

7 杨芳,刘红岩,徐维明,肖红剑,龙海亭,李珺,刘云丽;sTRAIL基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J];药物生物技术;2003年03期

8 韩卫宁,曹云新,张赟,李琦,刘雪松,金伯泉;不同活化系统对CD4~+T细胞凋亡诱导配体表达的影响[J];第四军医大学学报;2004年04期

9 梁艳;杨再兴;仲人前;;TRAIL与自身免疫性疾病[J];现代检验医学杂志;2007年02期

10 李宁,范学工;人Trail分子的克隆、表达及鉴定[J];中国现代医学杂志;2004年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 韦雪;漆永梅;张迎梅;;镉、活性氧自由基与自噬发生的分子机制[A];中国活性氧生物学效应学术会议论文集（第一册）[C];2011年

2 李康生;代剑平;;病毒感染与细胞自噬[A];新发和再发传染病防治热点研讨会论文集[C];2011年

3 王平;;骨骼肌自噬及运动对其影响机制研究进展[A];2011年中国生理学会运动生理学专业委员会会议暨“运动与骨骼肌”学术研讨会论文集[C];2011年

4 胡占英;张靖溥;孟杰;佟军威;秦伟;;斑马鱼自噬途径与帕金森病的相关性[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年

5 陈永;邹珅珅;谢志平;梁永恒;;酿酒酵母中的小G蛋白Ypt51对细胞自噬的影响[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年

6 熊海蓉;陈文;冯勇;罗凡;杨占秋;侯炜;;汉坦病毒感染宿主细胞后TRAIL受体的动态变化[A];新发和再发传染病防治热点研讨会论文集[C];2011年

7 陈加祥;伍一军;;溶血磷脂酰胆碱促进人成神经瘤SH-SY5Y细胞自噬[A];全国生化/工业与卫生毒理学学术会议论文集[C];2010年

8 ;自噬改变在锰诱导的PC12细胞毒性中的作用[A];中国毒理学会第三届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集[C];2011年

9 高俊玲;洪铭岩;王焕;李冉;田艳霞;都灵杰;崔建忠;;大鼠弥漫性脑创伤后脑皮质神经元自噬的变化[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年

10 邹珅珅;陈永;刘玉涛;谢志平;梁永恒;;酿酒酵母中的Trs130参与细胞自噬的研究[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 见习记者　王法争;[N];21世纪经济报道;2003年

2 张明永;[N];广东科技报;2011年

3 记者白毅;[N];中国医药报;2009年

4 ;[N];中国交通报;2004年

5 本报记者 严威川;[N];中国电脑教育报;2010年

6 主持人 本报记者 刘元煌;[N];中国经营报;2001年

7 记者 胡德荣;[N];健康报;2008年

8 本报记者 严威川;[N];中国电脑教育报;2009年

9 本报记者 秦淑文;[N];中国汽车报;2003年

10 国际金融报记者 宫广军 发自上海;[N];国际金融报;2003年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 何卫阳;TRAF2和RIP1介导的JNK激活诱导的自噬存活通路降低TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究[D];重庆医科大学;2013年

2 谢莹;晚期糖基化终产物诱导内皮细胞中的自噬[D];苏州大学;2011年

3 齐世美;磷酸化热休克蛋白27与肿瘤细胞TRAIL耐受的分子机制的研究[D];南京师范大学;2012年

4 易聪;乙酰化在自噬过程中的功能和分子机制的研究[D];清华大学;2012年

5 曾蓉;饥饿诱导的自噬在多发性骨髓瘤细胞中的特点及冬凌草甲素作用的机制研究[D];华中科技大学;2011年

6 刘扬;CRAd.pEgrl-Trail联合放疗对人乳腺癌细胞杀伤效应的实验研究[D];吉林大学;2012年

7 张俊;自噬在肺缺血再灌注损伤中的作用及其机制研究[D];华中科技大学;2013年

8 郑芳;两种小分子化合物调节自噬及其相关生物学功能的研究[D];中国科学技术大学;2012年

9 高恒;分泌型TRAIL基因修饰人脂肪干细胞靶向脑胶质瘤治疗的研究[D];苏州大学;2013年

10 林婷婷;TRAIL联合谷胱甘肽过氧化物酶模拟物治疗乳腺癌的实验研究[D];吉林大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 高显峰;TRAIL联合喜树碱诱导胰腺癌细胞凋亡的研究[D];吉林大学;2010年

2 韩丽;再生障碍性贫血患者TRAIL及其DR5的表达及其意义[D];山西医科大学;2010年

3 王咏莲;TRAIL、XIAP及P53在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义[D];山西医科大学;2010年

4 闫增强;p38MAPK在TRAIL诱导的多发性骨髓瘤细胞凋亡中作用及与CXCR4关系的研究[D];河北医科大学;2010年

5 贺怀强;TRAIL联合吉西他滨诱导人肝内胆管细胞癌细胞凋亡的研究[D];吉林大学;2011年

6 李广章;PKC-δ在TRAIL与阿霉素联合诱导骨肉瘤细胞株MG-63凋亡中的作用[D];大连医科大学;2010年

7 刘利宁;急性脑梗死患者血清TRAIL、OPG测定及其临床意义的研究[D];兰州大学;2011年

8 许骥;单链TRAIL重组表达及生物学活性研究[D];第二军医大学;2011年

9 陈洋;TRAIL联合白藜芦醇对人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的影响[D];中国医科大学;2010年

10 刘魏;HKa D5来源的多肽与TRAIL的融合表达及生物学活性的研究[D];第二军医大学;2011年

  本文关键词：TRAF2和RIP1介导的JNK激活诱导的自噬存活通路降低TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：163133