胚胎性转录因子FOXC2调控卵巢癌细胞增殖与侵袭的作用机制研究
本文选题：卵巢癌 切入点：肿瘤转移 出处：《吉林大学》2015年博士论文
【摘要】：卵巢癌(ovarian cancer,OC)是妇科系统最常见恶性肿瘤之一,死亡率高居妇科肿瘤榜首,卵巢上皮性癌(epithelial ovarian cancer,EOC)占卵巢癌的50%-70%,是卵巢癌最主要的病理类型,其中以卵巢浆液性囊腺癌最为常见。早期缺乏特异性症状、晚期复发、转移率高是导致卵巢癌死亡率居高不下的主要原因。因此提高早期诊断率、预防晚期复发和转移是卵巢癌面临的主要困难。现有的临床手段对于早期卵巢癌诊断并不明确,CA125、HE4等肿瘤标志物的联合检测有助于提高早期诊断率,HK6、HK10等新兴肿瘤标志物也对早期诊断卵巢癌有所助益,但并没有一种方法能够特异性地诊断早期卵巢癌。卵巢癌的传统治疗多采用手术+化疗的方式,近些年分子治疗、基因治疗、免疫治疗等新兴技术也逐渐进入临床并取得了一定成效,尤其是免疫治疗越来越受到人们的关注。因此寻找一个有效的诊断和治疗的靶点对于提高卵巢癌患者生存期、改善生存质量有着重要的意义。卵巢癌的转移形式主要为直接蔓延、腹腔种植和淋巴转移,肿瘤细胞从原发灶脱离进入腹腔,粘附到腹腔脏器表面,侵犯包膜进入脏器后大量增殖形成新的癌灶,整个过程是在癌-抑癌基因的调控、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)、抗失巢凋亡、免疫逃逸等多重机制作用下共同完成。因为肿瘤细胞的无限增殖、多向分化等生物学行为与胚胎干细胞相似,因此人们推测肿瘤其实是一种“返祖现象”。由此可见在胚胎发育和肿瘤发生、转移中可能存在共同的调控机制。某些调节胚胎发育的因子可能在肿瘤中同样发挥着重要作用。FOXC2(forkhead box C2,叉头框C2)是一种胚胎性转录因子,隶属于FOX家族,首次于淋巴水肿-重睫综合征(Lymphoedema-Distichiasis Syndrome,LD)中被发现。现有研究表明,在胚胎发育时期FOXC2对于淋巴管形成和正常发育有着重要意义,敲除Foxc2基因的小鼠胚胎淋巴管缺乏正常的形态和功能。而多种研究表明FOXC2在大肠癌、乳腺癌、宫颈癌等恶性肿瘤的侵袭和转移中同样起着重要作用。有学者认为FOXC2能促进大肠癌的侵袭和转移能力,还有实验证明FOXC2能够通过EMT促进乳腺癌细胞的侵袭能力。FOXC2和妇科肿瘤的发展也密切相关。有研究表明FOXC2能通过促进肿瘤血管生成来促进宫颈癌的转移,还有学者认为FOXC2可以通过调节淋巴管新生来促进宫颈癌和子宫内膜癌细胞的迁徙和转移能力。然而对于FOXC2在卵巢癌中所起的作用,尚无明确的结论。本实验主要针对卵巢上皮性癌(EOC)进行研究,通过免疫组化、RNAi等技术探究FOXC2在卵巢癌中的作用,为构建小鼠卵巢癌同种移植模型奠定基础,为卵巢癌的早期诊断和治疗提供新的靶点。目的:观察FOXC2在人卵巢上皮性癌组织中的表达以及Foxc2基因对小鼠卵巢腺癌细胞ID8生物学行为的影响,以此来探讨FOXC2对卵巢癌的增殖、侵袭能力的作用及其机制,为卵巢癌早期诊断和治疗寻找新的靶点。方法:1)用免疫组化方法检测来自吉大一院的13例卵巢标本中FOXC2的表达,观察其在人卵巢癌、交界性肿瘤和正常卵巢组织中的表达情况2)设计针对小鼠Foxc2靶基因序列的sh RNA(短发夹RNA)序列,构建重组质粒,进行慢病毒包装,并用倍比稀释法测定病毒滴度。3)用含有Foxc2-sh RNA表达载体的慢病毒感染小鼠卵巢腺癌细胞ID8,realtime PCR和Western Blot分析sh RNA对Foxc2m RNA和蛋白表达的抑制作用。4)CCK8法观察沉默Foxc2基因前后小鼠卵巢腺癌细胞ID8增殖能力的变化。5)Transwell实验观察沉默Foxc2基因前后小鼠卵巢腺癌细胞ID8侵袭能力的变化。结果1)FOXC2在人卵巢上皮癌有阳性表达,主要表达在肿瘤细胞核;FOXC2在卵巢浆液性交界性肿瘤中表达于内分泌腺上皮的腺管壁;FOXC2在卵巢癌和交界性肿瘤的间质部血管也有阳性表达。2)重组质粒的DNA测序结果显示与预期DNA序列吻合,重组成功。滴度测定表明Foxc2-sh RNA慢病毒载体构建成功。3)Foxc2-sh RNA能抑制小鼠卵巢腺癌细胞ID8中Foxc2m RNA的表达,抑制率分别为71.36%和56.3%(P0.05);FOXC2-sh RNA能抑制ID8中Foxc2蛋白的表达,其中Foxc2-sh RNA1的抑制作用最明显。4)沉默Foxc2基因48h后小鼠卵巢腺癌细胞ID8的增殖速度开始减慢,72h、96h后增殖速度明显减慢(P0.05)。5)沉默Foxc2基因后细胞侵袭能力较对照组降低了72.2%(P0.05)。结论:1)FOXC2在卵巢癌和交界性肿瘤组织和间质血管中均有表达,表明FOXC2参与了卵巢癌发生、发展的过程,其机制可能与诱导血管生成有关。2)成功构建了Foxc2-sh RNA的慢病毒载体。3)沉默Foxc2能够抑制卵巢癌细胞的增殖能力和侵袭能力。4)FOXC2可作为卵巢癌临床诊断和治疗的新靶点。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
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本文编号：1724757
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