miRNA-204-5p靶向RAB22A调控胶质瘤增殖、迁移与侵袭的机制分析

发布时间：2018-04-17 23:35

  本文选题：胶质瘤 + miRNA　； 参考：《北京协和医学院》2016年博士论文

【摘要】：胶质瘤是当前最常见的成人脑部肿瘤之一,在临床上主要表现为高侵袭性、高迁移性等特点,同时对于放疗有很强的抵抗作用,从而使得其预后比较差。同其他肿瘤一样,胶质瘤的病因多样,包括遗传因素、环境致癌因素、生活行为因素等。随着基础研究的发展,当前对于胶质瘤的形成与发展研究更加深入,也开发了一些有效的治疗方法。miRNA是一类长度20-24核苷酸的5’端带磷酸基团,3’端带羟基的非编码单链小分子RNA。miRNAs参与了生命过程中一系列的重要进程,在细胞的增殖、分化、生长、发育和凋亡中都发挥了重要的作用,也可调控机体的早期胚胎发育、脂肪代谢等。miRNAs也参与了众多恶性肿瘤的病理过程,miRNA表达谱异常也与胶质瘤有关。miR-204是肿瘤中最常见的异常改变的miRNA之一,miR-204前体在成熟过程中会加工形成2个互补单链小分子RNA,分别为miR-204-3p和miR-204-5p。现代研究已经发现miR-204-5p能够抑制恶性肿瘤的增殖,且与部分恶性肿瘤的肿瘤分期、淋巴结转移、较差的预后密切相关。RAB22A通常与转运小泡中的GTP结合而激活,而在膜融合后水解GTP转变为与GDP结合的非活性状态,但是RAB22A在肿瘤形成过程中发挥的作用却所知有限。在部分恶性肿瘤中,RAB22A是miR-204-5p的靶基因之一。我们从临床、细胞学与动物模型等三个部分进行分析,明确了miR-204-5p可作为肿瘤抑制因子通过靶向RAB22A对胶质瘤发挥抑制作用。本毕业论文主要包括以下三个部分：在第一部分研究中,我们分别运用原位杂交和qRT-PCR的方法检测了胶质瘤及其正常脑组织标本中miR-204-5p的表达,结果显示miR-204-5p在胶质瘤中的表达低于正常脑组织,并随着胶质瘤WHO分级级别增高,miR-204-5p的表达呈降低趋势。第二部分研究中,我们采用慢病毒表达载体构建了miR-204-5p表达体系以及转染合成的miR-204-5p类似物(mimic)与抑制齐(inhibitor),在LN229和U87胶质瘤细胞系中分别验证了miR-204-5p对胶质瘤细胞的生物学特性的影响及可能的机制。MTT、EdU、集落生成实验显示,Lev-miR-204-5p组能够显著地降低胶质瘤细胞LN229和U87的增殖,以及抑制其集落生成；Transwell(Boyden)实验发现,相比于LEV组,Lev-miR-204-5p组能够极大的抑制LN229和U87胶质瘤细胞的迁移与侵袭；我们同时运用生物信息学方法分析、预测了：niR-204-5p的靶基因的功能和信号通路聚集点,发现RAB22A 基因的3'-UTR存在 miR-204-5p结合位点。通过荧光素酶报告基因检测实验证明了,miR-204-5p能够显著的抑制RAB22A基因的表达。qRT-PCR实验与Western blot实验也证明了在胶质瘤细胞系LN229和U87细胞系中,miR-204-5p能够显著抑制AB22A的表达,以上的结果说明,RAB22A作为miR-204-5p的直接靶基因,被其负调控。第三部分研究我们验证了LN229细胞中的niR-204-5p过表达体系对裸鼠原位移植模型的影响。结果显示miR-204-5p过表达可以明显抑制胶质瘤的生长,减少Ki-67的阳性表达,从而延长小鼠的生存时间。本研究从临床水平、体外细胞水平和体内动物水平上探讨了miR-204-5p在胶质瘤中的生物学,验证了RAB22A为miR-204-5p的直接调控靶基因,其在miR-204-5p的胶质瘤细胞生长调控中发挥了重要作用,也为以后更深入地研究miR-204-5p的功能提供了重要的线索。
[Abstract]:The expression of miR - 204 - 5p in glioma and its normal brain tissue has been studied . The results show that miR - 204 - 5p plays an important role in the growth , development and apoptosis of glioma .
Transwell ( Boyden ) showed that Lev - miR - 204 - 5p significantly inhibited migration and invasion of LN229 and U87 glioma cells compared to the LEV group .
The expression of miR - 204 - 5p and miR - 204 - 5p in glioma cell line LN229 and U87 cell line have been demonstrated . The results show that miR - 204 - 5p can significantly inhibit the expression of miR - 204 - 5p in glioma cell line LN229 and U87 cell line . The results show that miR - 204 - 5p can significantly inhibit the expression of miR - 204 - 5p in glioma cell line LN229 and U87 cell line .

【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.41

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