姜黄素及顺铂对神经母细胞瘤增殖、凋亡及侵袭性的影响研究

发布时间：2018-06-17 03:27

  本文选题：姜黄素 + 顺铂　； 参考：《川北医学院》2017年硕士论文

【摘要】：目的:观察姜黄素(curcumin,以下简称CUR)及顺铂(cisplatin,以下简称DDP)对人神经母细胞瘤细胞(Neuroblastoma)SK-N-SH细胞系增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响,并初步探讨CUR和DDP诱导SK-N-SH细胞凋亡的可能机制。方法:(1)体外培养神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞,实验分5组:空白对照组(只有细胞无其他处理因素);溶剂对照组(仅给予0.1%DMSO);DDP(5、7.5、10μmol/L);CUR(5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L、25μmol/L、30μmol/L、35μmol);联用组(DDP5μmol/L+CUR30μmol/L、DDP7.5μmol/L+CUR30μmol/L、DDP10μmol/L+CUR30μmol/L);根据不同的处理因素培养24h后,CCK-8法检测DDP和(或)CUR对SK-N-SH细胞的增殖活性的影响,并筛选DDP和CUR的最佳联合浓度用于后续实验。(2)实验分4组:溶剂对照组(0.1%DMSO);CUR组(30μmol/L);DDP组(7.5μmol/L);联用组(CUR30μmol/L+DDP7.5μmol/L)。应用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Real-time PCR、Western blot分别检测Caspase-3、Bcl-2m RNA及蛋白表达;采用细胞划痕及Transwell侵袭实验分别检测细胞迁移及侵袭情况。结果:(1)CCK-8结果显示:DDP和CUR对SK-N-SH细胞均具有生长抑制作用,并且都对细胞的抑制作用有浓度依赖。而联用组与单药组比较,SK-N-SH细胞增殖明显降低。用金正均法计算各联用组q值,q均介于0.85-1.15之间,提示两药联用时抑制SK-N-SH细胞的增殖方面有药效相加效应,两药的最佳联合剂量是CUR30μmol/L+DDP7.5μmol/L。(2)流式细胞术检测结果显示:CUR及DDP单用组的细胞凋亡率显著高于溶剂对照组,联用组细胞凋亡率明显高于单药组。溶剂对照组、CUR组、DDP组和联用组凋亡的比例分别为3.11±0.14%、14.25±0.29%、8.89±0.28%、19.13±0.40%。(3)Real-time PCR检测结果显示:CUR、DDP单独作用可明显下调Bcl-2m RNA表达水平,Caspase-3m RNA表达上调,二者联合作用时效果更明显。(4)Western blot实验结果提示CUR或DDP作用后SK-N-SH细胞中的Caspase-3蛋白的表达水平明显升高,而Bcl-2蛋白的表达水平则明显降低。联用组处理细胞后,以上变化趋势更加明显。(5)Transwell侵袭实验及划痕实验结果表明CUR及DDP都可以影响神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的迂移及侵袭能力。经过药物刺激后,神经母细胞瘤的细胞迁徙及侵袭能力减弱,在划痕实验中,溶剂对照组的细胞迁移的距离和细胞数量明显多于用药组。在Transwell实验中单用CUR或者DDP处理过的细胞移至下孔的细胞数少于溶剂对照组,两药联用比单用药物效果更加显著。结论:(1)CUR及DDP对SK-N-SH细胞的增殖均有抑制作用,均表现出浓度依赖性。两药在抑制细胞的增殖作用表现为作用相加。(2)CUR及DDP均能促进SK-N-SH细胞凋亡,抑制其增殖,两药联用时效果更明显。二者对SK-N-SH细胞调亡的作用机制可能与下调Bcl-2及上调Caspase-3相关。(3)CUR和DDP能抑制SK-N-SH细胞的迁移和侵袭,两药联用组较单药使用更加显著。
[Abstract]:Aim: to observe the effects of curcumin (curcumin) and cisplatin (DDP) on the proliferation, apoptosis, migration and invasion of human neuroblastoma- SK-N-SH cell line, and to explore the possible mechanism of apoptosis of SK-N-SH cells induced by cur and DDP. Methods the neuroblastoma cell line SK-N-SH was cultured in vitro. 瀹為獙鍒，

本文编号：2029463