乳腺癌中ING4和MMP-9表达的相关性及意义
本文选题：ING4 + MMP-9 ； 参考：《锦州医科大学》2016年硕士论文
【摘要】：目的本实验旨在探究乳腺癌中ING4和MMP-9的表达情况,分析二者之间的相关性及临床意义,为判断乳腺癌的转移潜能、预后及指导患者临床个性化治疗等提供一定的理论依据。方法1.免疫组织化学法检测83例乳腺癌组织中ING4和MMP-9的表达,分析其与患者临床病理学特征的关系及二者之间的相关性。2.将ING4-siRNA转染到已培养好的乳腺癌细胞MDA-MB-231内,实验分三组:转染ING4-siRNA组(实验组)、Control-siRNA组(对照组)和未转染的空白组。3.Real-time PCR检测ING4基因m RNA情况,Western-blot检测蛋白表达情况,以判断转染效果并筛选出ING4缺失的细胞。4.Transwell侵袭实验和迁移实验检测ING4沉默后对MDA-MB-231细胞的侵袭、迁移的影响。5.Western-blot检测三组细胞中ING4沉默后MMP-9蛋白的表达情况。结果1.83例浸润性乳腺癌组织中ING4和MMP-9的阳性表达率分别为43.4%(36/83)和73.5%(61/83),二者的表达与患者的组织学分级、有无淋巴结转移、肿瘤临床TNM分期有关(P0.05),ING4的表达与MMP-9的表达呈负相关。2.Real-time PCR检测结果表明:三组MDA-MB-231细胞中,转染ING4-siRNA组ING4的m RNA表达量明显低于其他两组,差异有统计学意义(P0.01);而Control-siRNA组和空白组ING4的m RNA表达量之间无明显统计学差异(P0.05)。3.Western-blot检测三组MDA-MB-231细胞的结果:转染ING4-siRNA组ING4蛋白表达量明显低于另外两组,差异具有明显统计学意义(P0.01);而Control-siRNA组和空白组的ING4蛋白表达量之间无显著性差异(P0.1)。4.Transwell侵袭实验结果表明:实验组、对照组和空白组穿过基质胶和滤膜的细胞数分别为(215.35±8.12)、(118.50±5.03)和(119.72±6.20)个,三组之间差异有统计学意义(P0.01),三组相比,实验组分别比对照组和空白组的穿膜细胞数多。Transwell迁移实验结果表明:实验组、对照组和空白组的穿膜细胞数分别为(348.14±10.56)、(238.32±5.12)和(251.23±7.02),差异有统计学意义(P0.01),实验组穿膜细胞数明显高于另外两组。而对照组和空白组之间无明显差异(P0.1)。5.Western-blot检测结果显示,转染ING4-siRNA组经ING4沉默后MMP-9蛋白表达量明显上调,差异有明显的统计学意义(P0.01)。结论1.ING4和MMP-9的表达与乳腺癌的发生、发展密切相关,二者可存在相互协同作用,临床上将两者联合检测可能为乳腺癌早期诊断和临床个性化治疗及预后提供一定的参考。2.ING4表达降低或缺失不仅能促进乳腺癌细胞的侵袭与转移,而且还能上调MMP-9蛋白的表达。
[Abstract]:Objective to investigate the expression of ING4 and MMP-9 in breast cancer and to analyze their correlation and clinical significance in order to provide a theoretical basis for judging the metastatic potential of breast cancer, prognosis and guiding individualized treatment. Method 1. Immunohistochemical method was used to detect the expression of ING4 and MMP-9 in 83 cases of breast cancer. ING4-siRNA was transfected into the cultured breast cancer cell line MDA-MB-231. It was divided into three groups: transfected ING4-siRNA group (experimental group) and control group (control group) and untransfected blank group. 3. Real-time PCR was used to detect the expression of ING4 gene mRNA by Western-blot. In order to judge the transfection effect and screen out the ING4 missing cells. 4. Transwell invasion assay and migration assay were used to detect the invasion of MDA-MB-231 cells after ING4 silencing and the effect of migration. 5. Western-blot was used to detect the expression of MMP-9 protein after ING4 silencing in MDA-MB-231 cells. Results 1.The positive expression rates of ING4 and MMP-9 in 83 cases of invasive breast cancer were 43.4% (36 / 83) and 73.5% (61 / 83), respectively. The expression of ING4 was negatively correlated with the expression of MMP-9 in MDA-MB-231 cells. 2. Real-time PCR analysis showed that the mRNA expression of ING4 in the transfected ING4-siRNA group was significantly lower than that in the other two groups. There was no significant difference in mRNA expression of ING4 between Control-siRNA group and blank group (P0.05). 3. Western-blot analysis of MDA-MB-231 cells in three groups: the expression of ING4 protein in transfected ING4-siRNA group was significantly lower than that in other two groups. There was no significant difference in the expression of ING4 protein between Control-siRNA group and blank group (P0.1) .4.Transwell invasion experiment showed that the number of cells passing through matrix glue and filter membrane in experimental group, control group and blank group were (215.35 卤8.12), (118.50 卤5.03) and (119.72 卤6.20), respectively. There were significant differences among the three groups (P0.01). Compared with the control group and the blank group, the number of perforating cells in the experimental group was more than that in the control group and the blank group. The results of Transwell migration experiment showed that: experimental group, The number of perforating cells in the control group and the blank group were (348.14 卤10.56), (238.32 卤5.12) and (251.23 卤7.02), respectively. The number of perforating cells in the experimental group was significantly higher than that in the other two groups (P0.01). There was no significant difference between control group and blank group (P0.1). 5. Western-blot analysis showed that the expression of MMP-9 in ING4-siRNA transfected group was up-regulated after ING4 silencing, and the difference was statistically significant (P0.01). Conclusion 1. The expression of ING4 and MMP-9 is closely related to the occurrence and development of breast cancer. The combined detection may provide some reference for early diagnosis, individualized treatment and prognosis of breast cancer. 2. The decrease or absence of ING4 expression can not only promote the invasion and metastasis of breast cancer cells, but also up-regulate the expression of MMP-9 protein.
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
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，本文编号：2109936
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