Transgelin基因在肺腺癌发展中的作用研究

发布时间：2018-11-05 17:59

【摘要】：背景和目的肺癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁人类健康和生命。由于其起病隐匿,多数患者就诊时已属中晚期,仅能进行姑息治疗,预后较差,生存时间很短,总的5年生存率约10%-15%。因此迫切需要寻求新的早期诊断标志物和有效的治疗方法。近年来,国内外许多专家学者从基因水平探索肺癌发生、发展的机制,从而对相关基因及其表达产物进行干预将有可能为肺癌的诊治开辟一个新的领域。转胶蛋白(Transgelin)是肌动蛋白结合蛋白,属于钙调节蛋白家族成员之一。一些研究表明,在肺癌、结直肠癌、肝癌及前列腺癌等恶性肿瘤中,均发现transgelin基因的表达上调,提示transgelin可能有促进这些肿瘤生长的作用, 本课题组的前期研究发现,transgelin的表达水平在人非小细胞肺癌细胞中表达升高,提示transgelin在肺癌的发生发展中可能起了重要作用。本研究以慢病毒为载体,干扰transgelin在人肺腺癌细胞A549中的表达,建立transgelin稳定沉默的细胞株,观察其在裸鼠肺腺癌皮下移植瘤的生长情况,探讨transgelin在肺腺癌细胞中的体内生物学效应。同时应用组织芯片和免疫组化相结合方法进一步检测transgelin在肺腺癌组织、癌旁组织中的表达情况,同时分析transgelin的表达与肺腺癌临床分期、淋巴结转移等临床病理特征的相关性。因此,干扰transgelin基因的表达可望成为肺癌治疗的一个有效靶点。方法构建Transgelin shRNA慢病毒载体,将其转染入人肺腺癌A549细胞中,并采用Real-Time PCR、Western blot法检测转染前后trangelin表达变化。成功建立皮下移植瘤模型18只,按皮下注射细胞不同分为3组：(1)慢病毒转染transgelin shRNA的A549细胞(实验组)(2)慢病毒转染无关序列的A549细胞(阴性载体对照组)(3)未转染任何载体的A549细胞(空白对照组)。每5天测量肿瘤大小,第30天处死所有裸鼠,计算肿瘤体积,治疗前后裸鼠体重变化及抑瘤率。留取组织标本,免疫组化法检测transgelin和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白在皮下移植瘤组织中的表达情况。将具备完成临床资料的75例肺腺癌的癌组织标本及相应的癌旁组织制成150点组织芯片,应用免疫组化方法检测transgelin在肺腺癌组织、癌旁组织中的表达情况,同时分析transgelin的表达与肺腺癌临床分期、淋巴结转移等临床病理特征的相关性。结果 (1)三组裸鼠皮下均出现皮下移植瘤,成瘤率为100%。与阴性载体对照组和空白对照组相比,实验组裸鼠皮下移植瘤瘤体积生长速度明显缓慢,体积显著小,差异有统计学意义(P0.05),体积抑瘤率达69.2%。与阴性载体对照组和空白对照组相比,实验组肿瘤重量明显减轻,差异有统计学意义(P0.05),瘤重抑瘤率达75%。 (2)实验组transgelin蛋白表达水平明显低于阴性载体对照组及空白对照组,模型构建成功。同时PCNA蛋白水平显著低于阴性载体对照组及空白对照组。 (3)免疫组化结果显示癌组织中transgelin蛋白阳性表达率68%(51/75),高于癌旁组织中表达的40%(30/75)(1)=0.001,x2=11.836)。 (4) Transgelin的表达在(Ⅰ+Ⅱ)期与(Ⅲ+Ⅳ)期间的表达差别有统计学意义(x2=6.117,p0.023)；在有淋巴结转移组与无淋巴结转移组间的表达差别有统计学意义(χ2=5.672,p0.025)；在(高+中)分化组与低分化组间的表达差别有统计学意义(χ2=6.63,p0.014)；Transgelin蛋白的高表达与性别、年龄、肿瘤大小无关(p值均0.05)。结论：利用慢病毒trans gelin shRNA载体干扰trans gelin基因表达能有效抑制人肺腺癌A549在裸鼠肿瘤体积的生长,其中可能的一种机制是抑制PCNA蛋白表达,即抑制裸鼠体内细胞的增殖有关。同时肺腺癌组织中trans gelin蛋白表达水平明显高于癌旁组织,transgelin的表达水平与肺腺癌的临床病理分期、分化、淋巴结转移有关系,提示trans gelin在肺腺癌的发生发展中及促进促进肺腺癌的淋巴结转移方面起着重要作用,有可能是判断肺腺癌预后及肺癌基因治疗的一个潜在靶点。
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【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2

【参考文献】