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缺氧诱导因子-2α对基质金属蛋白酶-2启动子活性的转录调控作用

发布时间:2018-12-10 10:51
【摘要】:目的克隆基质金属蛋白酶(MMP)-2基因5'上游1.7 kb启动子,构建启动子-萤光素酶报告基因载体pGL3-MMP-2 pro,探讨缺氧诱导因子(HIF)-2α对MMP-2启动子转录活性的影响。方法采用PCR扩增MMP-2启动子上游区域基因片段,插入到含有萤光素酶报告基因的载体PGL3-basic中构建重组子,经双酶切和测序鉴定后,将重组子转染MCF-7细胞,通过双萤光素酶活性分析HIF-2α对MMP-2启动子转录活性的影响。结果 PCR扩增的1.7 kb片段经测序正确无误,pGL3-MMP-2 pro转染MCF-7细胞48 h后,双萤光素酶活性测定结果显示加CoCl_2诱导的pGL3-MMP-2 pro+HIF-2α组启动子活性显著高于pGL3-MMP-2 pro组、阴性对照组和空白对照组(均P0.05)。结论 HIF-2α促进了MMP-2启动子转录活性。
[Abstract]:Objective to clone the 5 'upstream 1.7 kb promoter of matrix metalloproteinase (MMP) 2 gene and construct the promoter luciferase reporter gene vector pGL3-MMP-2 pro, To investigate the effect of hypoxia inducible factor (HIF)-2 伪 on the transcriptional activity of MMP-2 promoter. Methods the upstream region of MMP-2 promoter was amplified by PCR and inserted into the vector PGL3-basic containing luciferase reporter gene. After double enzyme digestion and sequencing, the recombinant gene was transfected into MCF-7 cells. The effect of HIF-2 伪 on the transcriptional activity of MMP-2 promoter was analyzed by double luciferase activity. Results the 1.7 kb fragment amplified by PCR was correctly sequenced, and pGL3-MMP-2 pro was transfected into MCF-7 cells for 48 h. The results of double luciferase activity test showed that the promoter activity of pGL3-MMP-2 pro HIF-2 伪 group induced by CoCl_2 was significantly higher than that of pGL3-MMP-2 pro group, negative control group and blank control group (P0.05). Conclusion HIF-2 伪 promotes the transcriptional activity of MMP-2 promoter.
【作者单位】: 新乡医学院;新乡市中心医院;
【基金】:河南省自然科学基金面上项目(16230041220) 河南省高校青年骨干教师资助项目(2012GGJS-136) 新乡医学院联合培育基金资助项目(2014QN113) 河南省教育厅高等学校重点科研项目(16A310002) 河南省卫生厅医学科技攻关项目(201403133)
【分类号】:R730.2

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本文编号:2370449

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