【摘要】：实验背景:乳腺癌(Breast cancer)是全世界女性最常见的恶性肿瘤之一。近年来,随着生活压力的逐年递增及环境恶化等各方面因素的影响,全世界女性乳腺癌的发病率逐年递增,其病死率位居第二位,仅次于肺癌,几乎所有乳腺癌患者的死亡原因都是远处转移。因此,阐明乳腺癌转移的发生机制将有助于乳腺癌防治。Wnt信号通路是一条在进化上高度保守的生物分子信号转导通路,该信号转导通路调控胚胎形成、神经系统形成等多种发育过程,并且在维持机体的动态平衡中起到了至关重要作用,同时也参与了细胞的增殖、分化、存活、凋亡,以及各种肿瘤细胞的侵袭和迁移。β-catenin在细胞内累积是Wnt信号通路异常的核心,并通过其下游转导通路引起特异靶基因的转录。DKK1是DKK家族中的成员之一,也是抑制Wnt/β-catenin生物分子信号通路传导作用最强的一种分泌性糖蛋白。DKK1作为Wnt/β-catenin生物分子信号通路的抑制剂,可通过调控Wnt/β-catenin通路来决定细胞的迁移、增殖等特性。已有文献证实DKK1对于肝癌、肺癌及胃癌的发生发展起着重要作用,但是DKK1在乳腺癌转移中的作用及其机制目前尚不清楚,这是本课题主要解决的问题。实验目的:本文以乳腺癌细胞系和临床乳腺癌组织标本为研究对象,探讨DKK1在乳腺癌转移中的作用及其作用机制。实验方法:采用RT-PCR和Western blot实验检测乳腺癌及癌旁组织、四种乳腺癌细胞(MDA-MB-453,MCF-7,MDA-MB-231和HCC-1937)和一种乳腺癌原代培养细胞中DKK1 mRNA及其蛋白的表达。在乳腺癌细胞系中过表达或基因敲减DKK1,通过MTT比色法、划痕(伤口愈合)实验和Transwell实验分别检测乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力;通过Western blot实验检测Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin,E-caherin,MMP-7等相关蛋白的表达。通过免疫组化实验检测乳腺癌组织中DKK1,β-catenin,MMP-7,E-caherin的表达。实验结果:1、与癌旁组织相比,乳腺癌组织中DKK1在mRNA和蛋白水平的表达相对较低。2、在四种乳腺癌细胞及原代培养细胞中,DKK1在mRNA及蛋白水平上的表达无明显差异。3、在乳腺癌细胞系中过表达DKK1能够明显抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力;相反,基因敲减乳腺癌细胞中DKK1能够明显促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。4、在乳腺癌细胞系中过表达DKK1能明显减少乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231中β-catenin和MMP-7蛋白的表达、上调E-cadherin的表达,而短发夹RNA(shRNA)敲减DKK1后,β-catenin和MMP-7在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231中的蛋白表达显著增加、E-cadherin的表达显著减少。5、临床标本结果显示:乳腺癌组织中β-catenin、MMP-7表达明显较癌旁组织多,与DKK1的表达成负相关,而E-cadherin的表达在乳腺癌组织中明显较癌旁组织低,与DKK1的表达成正相关。实验结论:1、乳腺癌中DKK1表达的下调促进了乳腺癌的增殖和转移。2、乳腺癌中DKK1表达的下调导致了Wnt/β-catenin信号通路的激活,使β-catenin及其下游蛋白MMP-7的表达上调,进而MMP-7通过水解E-cadherin促进了乳腺癌的增殖和转移。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
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本文编号：2412455
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