STIM1和STIM2在TGF-β介导乳腺癌细胞EMT过程中作用的研究

发布时间：2019-01-28 21:39

【摘要】：背景乳腺癌是威胁全球女性健康的一种疾病,近年来发病率不断攀升,已经成为女性肿瘤中死亡率最高的疾病。乳腺癌的转移是导致高死亡率的主要原因,转移的发生通常伴随着肿瘤细胞的迁移与侵袭。上皮间质转换(Epithelial-Mesenchymal Transitions,EMT)是乳腺癌细胞从上皮表型转化成间质型细胞的一个现象。EMT的发生伴随着许多的生理和病理的变化活动,一些与EMT相关的生物标志物发生了变化,如上皮标志分子E-Cadherin表达的减少;间质标志分子N-cadherin、Vimentin表达的增多;EMT转录分子Snail,Slug和Twist表达的增多。生长因子TGF-β(TransformingGrowthFactor-β)是一种EMT诱导因子,TGF-βⅠ和TGF-βⅡ形成复合体,激活Smad2和Smad3,并介导EMT的活动。文献报道,钙电流可以影响EMT,特别是钙库调控的钙电流(Store-Operated Calcium Entry,SOCE)。基质交感分子 1(Stromal Interaction Molecule 1,STIM1)是SOCE的重要组成部分,是存在于内质网和细胞膜上的一种蛋白,当感应到内质网里的Ca2+浓度的减低时,它就会聚集并转位到内质网膜和细胞质膜交汇处的近膜区,打开SOCE通道,外钙内流。基质交感分子2(Stromal Interaction Molecule2,STIM2)与STIM1是同系物,但是关于它的研究甚少而且具有争议,有部分研究指出STIM2介导SOCE,但又有实验指出STIM2会抑制SOCE,因此STIM2在SOCE中的作用需要深入研究。目的关于STIM1与SOCE的关系的研究已经相对清晰,但是在TGF-β诱导产生EMT后,STIM1、STIM2在其中又起着怎样的作用仍需要深入研究。本实验主要是探究STIM1与STIM2在介导TGF-β产生的EMT之间的区别,并探讨其影响转移的钙信号机制。方法1.在Kmplot肿瘤患者预后数据库中检测STIM1和STIM2在乳腺癌患者中的生存曲线。2.采用慢病毒干扰和过表达STIM1与STIM2,并用嘌呤霉素进行筛选。3.采用免疫印迹法对干扰和过表达STIM1与STIM2的不同处理组进行蛋白量的检测,观察干扰和过表达的效果。4.采用Transwell方法,对TGF-β刺激24h后的不同处理组的MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌细胞进行侵袭力变化的观察。5.采用RT-qPCR方法和免疫印迹法检测EMT标志物E-Cadherin、Vimentin、Snaill,观察不同处理组STIM1与STIM2的EMT的强弱。6.采用膜片钳实验技术观察不同处理组的SOCE的大小。7.采用Confocal实验检测不同处理组SOCE与非SOCE的大小。结果1.Kmplot数据库检测到在乳腺癌临床患者中STIM1与STIM2表达高的患者预后差。2.免疫印迹检测出慢病毒干扰和过表达STIM1与STIM2效果显著。3.Transwell结果显示乳腺癌细胞在干扰STIM1和干扰STIM2后侵袭力减弱,过表达STIM1和STIM2后侵袭力增强。4.RT-qPCR方法和免疫印迹法发现,乳腺癌细胞在TGF-β刺激24h后,干扰STIM1组和干扰STIM2组的EMT现象减弱,过表达STIM1组和STIM2组EMT增强。5.膜片钳和Confocal结果显示,乳腺癌细胞在TGF-β刺激24h后,干扰STIM1组和STIM2组的SOCE减小,过表达STIM1组和STIM2组的SOCE增强。而干扰和过表达STIM1组的非SOCE大小无显著性差异,干扰STIM2组的非SOCE减小,而过表达STIM2组非SOCE增强。结论本实验中,我们证明了 STIM蛋白参与了乳腺癌细胞的TGF-β刺激后的EMT过程。我们区分了 STIM1和STIM2在TGF-β刺激后的钙电流中的作用,同时,我们发现STIM1通过调节SOCE介导TGF-β刺激后的EMT。而STIM2可以同时调节SOCE与非SOCE介导TGF-β刺激后的EMT。
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【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.9

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本文编号：2417338