膜异位hMSH2分子促进γδT细胞对肺癌细胞的体外细胞毒活性

发布时间：2019-07-31 13:00

【摘要】：人γδT细胞是T淋巴细胞中的一个特殊亚群,具有天然免疫细胞的诸多特征,是联系固有免疫和适应性免疫应答的桥梁,在机体免疫监视和抗肿瘤免疫应答过程中发挥重要的作用。γδT细胞因其主要组织相容性复合物(Major histocompatibility complex,MHC)非限制性的、广谱的肿瘤抗原识别模式、快速活化的效应机制、强大的细胞毒作用和多种抗肿瘤效应性细胞因子的分泌能力,在肿瘤的免疫细胞治疗中备受重视。γδT细胞可直接识别多种抗原分子,研究最多的是小分子磷酸盐抗原,基于磷酸化抗原扩增Vγ9Vδ2T细胞的过继细胞治疗早已进入临床Ⅰ/Ⅱ期试验。此外,γδT细胞还可识别一些应激条件诱导的、在细胞表面异位表达的蛋白类配体。本课题组前期研究成果表明,人MutS同源蛋白2(Human MutS homologue 2,hMSH2)是γδT细胞识别的肿瘤相关蛋白类抗原。hMSH2分子是DNA错配修复系统的一个重要成员,主要在细胞质中合成,与系统其他成员hMSH3或hMSH6分子形成异源二聚体进入细胞核中,参与损伤或错配的DNA的修复过程。在多种肿瘤的发生发展过程中,均可以检测到hMSH2基因突变或蛋白功能异常。本实验室在前期工作中采用基于T细胞受体(T cell receptor,TCR)δ 链的互补决定区 3(Complementary determining region 3,CDR3)结合特性的筛选策略,筛选到hMSH2分子是γδT细胞识别的肿瘤相关配体。进一步研究发现,hMSH2分子在多种肿瘤细胞膜表面呈广泛的、不同水平的异位表达。除了肿瘤之外,在病毒感染及氧化应激的情况下,hMSH2分子也能异位表达于细胞膜表面。膜异位表达的hMSH2分子被γδT细胞受体(γδTcellreceptor,TCRyδ)和NK细胞受体成员2D(Natural killer group 2 member D,NKG2D)双重识别后,参与介导γδT细胞对靶细胞的杀伤或清除作用。但是,目前异位表达的hMSH2分子介导γδT细胞杀伤肿瘤细胞的相关机制仍不清楚,澄清hMSH2分子介导γδT细胞杀伤肿瘤细胞的相关机制,有助于进一步揭示γδT细胞在肿瘤免疫监视及抗肿瘤免疫中的重要作用。另外,研究hMSH2分子在促进γδT细胞细胞毒活性方面的效应,对于优化基于γδT细胞的肿瘤过继免疫治疗策略具有重要意义。本研究通过构建hMSH2分子过表达的肺癌细胞模型,探索膜表面异位表达的hMSH2分子介导γδT细胞杀伤肺癌细胞的相关机制,并研究hMSH2分子在促进γδT细胞的细胞毒活性方面的效应。首先,我们检测了 4种常用的人肺癌细胞系(NCI-H520,GLC-82,NCI-H1703 及 NCI-H446)及人胚肺成纤维细胞 MRC-5 细胞表面膜hMSH2分子的异位表达水平。结果发现,不同肺癌细胞系膜表面hMSH2的表达情况差异较大,从中选择了细胞膜表面hMSH2分子低表达的NCI-H520细胞作为构建过表达hMSH2分子的肺癌细胞模型。利用构建的重组表达载体cFugw-hMSH2转染NCI-H520细胞,瞬时表达hMSH2-EGFP融合蛋白。结果发现,转染后NCI-H520细胞膜表面的hMSH2分子水平显著上调,阳性细胞比例从原先的12.67±0.80%升高到62.53±8.22%。体外细胞毒活性实验结果显示,hMSH2分子在NCI-H520细胞细胞膜异位表达水平的升高能有效增强γδT细胞对其的细胞毒活性。在检测对杀伤过程中γδT细胞的活化及细胞毒相关效应分子的水平时发现,在与过表达hMSH2的NCI-H520细胞相互作用后,γδT细胞活化相关分子CD69和CD107a的表达水平显著升高,并分泌更多的抗肿瘤细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。这一结果提示,hMSH2分子可能是通过促进γδT细胞的活化、脱颗粒作用及抗肿瘤细胞因子IFN-γ与TNF-α的分泌来增强γδT细胞对肺癌细胞NCI-H520的体外细胞毒活性。另外,我们还发现,经小分子磷酸盐抗原唑来膦酸(Zoledronicacid,ZOL)处理后,,γδT细胞对NCI-H520细胞的杀伤活性增加,并且呈现一定的剂量依赖性;同时,在相同条件的唑来膦酸预处理组中,γδT细胞对hMSH2分子膜异位表达上调的NCI-H520细胞的杀伤效率明显高于对野生型NCI-H520细胞。由此可见,hMSH2分子在促进γδT细胞体外杀伤肺癌细胞系NCI-H520细胞的活性方面,与唑来膦酸存在协同效应,提示二者能协同用于抗肿瘤免疫治疗。综上,本研究得出以下主要结论:1、细胞膜异位表达的hMSH2分子参与介导γδT细胞对肺癌细胞的细胞毒作用,其膜异位水平与γδT细胞对靶细胞的杀伤作用成正相关;2、膜异位hMSH2分子介导γδT细胞杀伤肺癌细胞的机制可能与促进γδT细胞活化及分泌抗肿瘤细胞因子IFN-y与TNF-α有关;3、膜异位hMSH2分子在促进γδT细胞体外杀伤肺癌细胞的过程中与磷酸化抗原存在协同作用。
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R734.2

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 ;尼古丁加速肺癌细胞的增长[J];中华医学信息导报;2003年09期

2 丁会;孙晓艳;吕晓红;;氯化汞对小鼠Lewis肺癌细胞周期的影响[J];吉林医学;2008年23期

3 ;肿瘤坏死因子受体在人类肺癌细胞和正常肺组织中的表达[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;1997年02期

4 巩国亭,田立华,宋佃刚;儿童胸水查到肺癌细胞[J];上海医学检验杂志;1998年02期

5 王洪斌,熊海涛,苏万芳,胡匡祜,黄志英;肺癌细胞形态量化和结构特征的抽取[J];生物物理学报;1999年01期

6 董强刚,江晓丰,沙慧芳,李鲁萍,乔生军,许凯黎;外周血循环中肺癌细胞的流式细胞仪定量分析[J];肿瘤;2000年01期

7 ;能杀死肺癌细胞的蛋白质[J];医学情报工作;2000年03期

8 周晓琦,刘剑平,李彤;化疗药物对原代肺癌细胞周期的影响[J];中国老年学杂志;2003年09期

9 王洪武,刘静,段蕴铀,杨平地,黄友章,张燕群,周一欣,冯华松,颜霞,陆海英;氩氦靶向治疗对肺癌细胞的灭活作用[J];海军总医院学报;2003年02期

10 胡振红,彭琪琳,汪君,傅祖红,司斌,刘志遐;肺癌细胞在缺氧状态下体外侵润力的变化及分子基础[J];中国医师杂志;2004年02期

相关会议论文 前10条

1 王洪武;黄友章;;冻融的肺癌细胞对骨髓树突状细胞的免疫调节作用[A];第一届中国肿瘤靶向治疗技术大会论文集[C];2003年

2 李智勇;刘增礼;吴锦昌;周俊东;申咏梅;劳勤华;;~(125)I-脱氧尿嘧啶核苷对肺癌细胞A549的杀伤作用[A];首届全国分子核医学暨分子影像学学术交流会资料汇编[C];2006年

3 李智勇;刘增礼;吴锦昌;周俊东;申咏梅;劳勤华;;~(125)I-脱氧尿嘧啶核苷对肺癌细胞A549的杀伤作用[A];第三届全国核素显像暨核素治疗学术交流会论文汇编[C];2006年

4 王秦秦;姜平;李继梅;唐睿珠;陈新明;;肺癌细胞相关蛋白分子实验研究[A];西部大开发 科教先行与可持续发展——中国科协2000年学术年会文集[C];2000年

5 谢庆军;李季风;胡晓燕;;超级智能基因药物对人恶性肺癌细胞的的抑制作用[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学学术大会论文集[C];2006年

6 李鸣;黄承钰;魏大鹏;;药食两用植物提取物影响肺癌细胞生长的血清药理学研究[A];中国营养学会第九次全国营养学术会议论文摘要汇编[C];2004年

7 冯华松;黄友章;段蕴铀;杨平地;李泳群;兰雨;;氩氦刀冷冻处理的肺癌细胞增强树突状细胞诱导抗肿瘤效应[A];第一届中国肿瘤微创治疗研讨会暨中国抗癌协会肿瘤微创治疗专业委员会成立大会论文集[C];2005年

8 冯华松;黄友章;段蕴铀;杨平地;兰雨;李泳群;;氩氦刀冷冻处理的肺癌细胞可致敏人骨髓树突状细胞[A];第一届中国肿瘤微创治疗研讨会暨中国抗癌协会肿瘤微创治疗专业委员会成立大会论文集[C];2005年

9 喻伦银;田鸿生;舒清波;刘铭球;夏东;;超氧化物歧化酶对A_(549)肺癌细胞一些生物学特性的影响[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

10 秦建军;周清华;袁淑兰;王艳萍;陈晓禾;何金涛;;逆癌酮对肺癌细胞的生长抑制作用及其机理的初步研究[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

相关重要报纸文章 前10条

1 记者 文俊 实习生 范敏 通讯员 罗芳;新技术“点亮”肺癌细胞[N];湖北日报;2014年

2 本版编辑邋夏洪平 编译 复旦大学附属中山医院肺科 张新;肺癌细胞有“致命弱点”[N];健康报;2008年

3 新讯;利用纳米技术数分钟可识别九成以上肺癌细胞[N];医药经济报;2006年

4 特约记者 万初升;“核弹”自动追击肺癌细胞[N];家庭医生报;2005年

5 记者 何屹;英利用“冷冻疗法”杀死肺癌细胞[N];科技日报;2005年

6 记者 何德功;阻遏肺癌扩散[N];新华每日电讯;2002年

7 ;美证实SLC蛋白能杀死肺癌细胞[N];中国中医药报;2000年

8 张鑫华;肺癌有望实现早诊断[N];医药养生保健报;2006年

9 杨茜;美发现肺癌化疗药物产生耐药性机制[N];中国医药报;2006年

10 ;美发现杀死肺癌的细胞蛋白[N];中国中医药报;2002年

相关博士学位论文 前10条

1 门雪琳;肺癌组织与细胞中Cullin7的表达及临床意义的研究[D];山东大学;2015年

2 程传乐;地钱素C诱导肺癌细胞死亡及抑制其侵袭转移的机制研究[D];山东大学;2015年

3 宋千成;microRNA-483-5p通过抑制RhoGDI1和ALCAM促进肺癌细胞EMT、侵袭和转移[D];南方医科大学;2013年

4 孔祥祯;酪氨酸代谢酶 HPD 在肺癌发生和发展中的作用及机制研宄[D];天津大学;2015年

5 金景鹏;miR-517a-3p和miR-610对肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制[D];吉林大学;2016年

6 高海祥;miR-200c通过调节细胞上皮—间质转换改变肺癌细胞对克唑替尼的敏感性[D];河北医科大学;2016年

7 曹卓;miR-130a在肺癌中的表达及相关靶基因和肺癌发病机制探讨[D];山东大学;2016年

8 章卫华;MLL2促进肺癌A549细胞发生发展中的作用机制及萝卜籽素抑制肺癌A549细胞的生物信息学研究[D];南昌大学;2016年

9 姚媛菲;MARVELD1影响肺癌细胞基本生物学特征的分子机制[D];哈尔滨工业大学;2016年

10 游良琨;Crizotinib诱导肺癌细胞保护性自噬及其机制研究[D];浙江大学;2015年

相关硕士学位论文 前10条

1 陆必超;膜异位hMSH2分子促进γδT细胞对肺癌细胞的体外细胞毒活性[D];北京协和医学院;2017年

2 李昊;血管内皮生长因子受体抑制剂DMH4对肺癌细胞增殖、迁移及凋亡的作用[D];河北大学;2015年

3 王海洋;延伸复合体3（ELP3）对肺癌细胞A549的作用及调节机制研究[D];内蒙古大学;2015年

4 高爱迪;CT45A1基因促进肺癌细胞侵袭和转移的作用及其机制[D];苏州大学;2015年

5 杨周萍;GSTA1在肺癌细胞中的表达及其功能研究[D];广东药学院;2015年

6 陈碧玉;抑癌基因TCF21对肺癌细胞A549增殖和迁移的影响[D];贵阳医学院;2015年

7 李晓静;KRAS基因表达对肺癌细胞糖酵解途径的影响及机制[D];第三军医大学;2015年

8 刘艳;VPS33B抑制肺癌细胞增殖，，迁移和侵袭[D];南方医科大学;2015年

9 杨杰;磷酸果糖激酶相关微小RNA影响肿瘤细胞糖代谢的机制研究[D];宁波大学;2015年

10 林高阳;miR-26a靶向GSK-3β调控β-catenin信号通路增强肺癌细胞转移潜能的机制研究[D];天津医科大学;2015年

本文编号：2521341