TLR4、IL-23及IL-17A在原发性肝癌中的作用

发布时间：2019-08-20 10:15

【摘要】：目的本课题以肝癌细胞株HepG2和原发性肝癌临床病理组织标本为研究对象,观察TLR4(Toll-like receptor 4,TLR4)介导的信号通路对原发性肝癌中IL-23(interleukin-23,IL-23)和IL-17A表达的影响,分析TLR4、IL-23及IL-17A与原发性肝癌临床病理特征的关系,揭示TLR4可经由IL-23/IL-17A炎症轴在原发性肝癌的发生和发展中起作用,为原发性肝癌的临床免疫治疗提供理论和实验依据。方法(1)应用CCK-8法检测TLR4的激活剂LPS(Lipopolysaccharides,LPS)与髓样分化因子-88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)的阻断剂ST2825对HepG2细胞增殖活性的影响。(2)运用ELISA法检测LPS和ST2825对HepG2细胞分泌IL-23与VEGF的影响。(3)用RT-qPCR技术检测HepG2细胞TLR4、IL-23、IL-17A、IL-6、及NF-κB mRNA的转录水平。(4)采用Western-blot法测定HepG2细胞TLR4、IL-23及IL-17A蛋白的表达。(5)收集宁夏医科大学附属医院临床上未经化疗和放疗的肝癌癌标本45例,行临床病理组织分型和临床分期,同时取远端癌旁正常组织20例(均证实无癌细胞)为正常对照,行常规石蜡包埋、切片,免疫组化法检测肝癌组织和远端癌旁组织TLR4、IL-23和IL-17A的表达及与临床病理的关系。结果(1)CCK-8法检测结果显示,与细胞对照组相比较,选用的1 mg/l LPS培养24 h对HepG2细胞无毒且能促进细胞增殖,选用ST2825 40μmol/l的浓度培养8 h对HepG2无毒且则抑制细胞生长。(2)LPS促进了HepG2细胞的IL-23与VEGF的表达量,随时间的增长表达水平升高,阻断MyD88后其表达水平下降。(3)LPS促进HepG2细胞株TLR4、IL-23、IL-17A、IL-6、NF-κB mRNA的转录;阻断MyD88后则IL-23、IL-17A、IL-6、NF-κB mRNA的转录下降。(4)LPS促进HepG2细胞株TLR4、IL-23、IL-17A的蛋白表达,阻断MyD88后IL-23和IL-17A蛋白表达则降低。(5)免疫组化结果显示,肝癌组织和癌旁正常组织中均有TLR4、IL-23及IL-17A的表达,但TLR4、IL-23及IL-17A在肝癌组织的蛋白表达阳性率显著高于远端癌旁的正常组织,差异具有统计学意义(P0.05);45例肝癌组织中TLR4、IL-23、IL-17A的蛋白表达与淋巴结转移、TNM分期有关(P0.05),而与患者的年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤发生部位均无统计学意义(P0.05)。结论(1)TLR4、IL-23及IL-17A参与原发性肝癌的发生与进展。(2)TLR4/MyD88介导的信号转导通路对IL-23/IL-17A炎症轴具有调控作用。
【图文】：

在电子载体 1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯（1-Meth体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲佨产物（量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在 450 nm450），可间接反映活细胞数量。接种 96 孔板，分为 5 组，进行预处理加 LPS (0 mg/l，0.g/l) 培养不同的时间（6 h，12 h，24 h，36 h）。通过 CC0 nm，OD 值分析结果如下图（图 1），实验结果显示在不同2 细胞的 OD450统计学无差异，而处理 24 h OD450用统计g/l、5 mg/l、10 mg/l LPS 分别两两比较无统计学差异，两比较有差异性统计学意义 P＜0.05。此结果说明 1 mg有强的增值能力。下一步实验 LPS 对 HepG2 的处理都是

接种 96 孔板，分为四组进行预处理 1 mg/l LPS 24 小时 μmol/l，，20 μmol/l，40 μmol/）进行培养时间是 4 h，8 h 450 nm，OD 值分析结果如下图（图 2），在 4 h，12 h 检无差异，而处理 8 h OD450值用统计学多因素方差分析 P对照 10 μmol/l、20 μmol/l ST2825 两两比较有统计学差异胞的处理是 40 μmol/l 时间是 8 h。
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 姚玉霞;原发性肝癌自发破裂误诊1例[J];临床荟萃;2000年10期

2 周最明,梁巧明;原发性肝癌6例临床病理分析[J];实用儿科临床杂志;2000年01期

3 苑秀军,郑有贵,刘东屏,傅宝玉;原发性肝癌病人血清α转化因子测定及意义[J];中国医科大学学报;2000年S1期

4 汪耀,曾学寨,陈岩,陈曼丽,钱贻简;老年人原发性肝癌23例临床病理分析[J];中华老年医学杂志;2000年01期

5 顾长虹,孙玉琢,唐淑贤;原发性肝癌自发破裂出血25例的诊断和治疗[J];中国急救医学;2000年05期

6 邱金华,许岸高;以腹泻为首发表现的原发性肝癌15例临床分析[J];广州医药;2000年02期

7 白波,李松波;原发性肝癌误诊原因分析[J];黑龙江医学;2000年04期

8 盛家和,洪西田,王征帆;乙型肝炎病毒感染模式与原发性肝癌关系的研究[J];疾病监测;2000年04期

9 邱清武;一家族原发性肝癌9例报告[J];临床消化病杂志;2000年02期

10 冯少春,张瑛;一家兄妹四人均患原发性肝癌[J];兰州医学院学报;2000年03期

相关会议论文 前10条

1 左朝晖;谭春祁;莫胜川;周德善;欧阳永忠;梁赵玉;古善智;柴小立;许若才;;原发性肝癌术后复发的诊治[A];第十二届全国肝癌学术会议论文汇编[C];2009年

2 覃晓;梁雪婧;孙振;梁水庭;;原发性肝癌术后生存10年以上61例分析[A];第十二届全国肝癌学术会议论文汇编[C];2009年

3 潘立阳;李晓枫;马莉;高晓虹;;非肝炎人群原发性肝癌危险因素1:3病例对照研究[A];全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集[C];2011年

4 周一汝;陈晓英;;原发性肝癌切除后经皮下药泵化疗50例体会[A];全国外科护理学术会议暨专题讲座论文汇编[C];2000年

5 李忱瑞;史仲华;郝玉芝;刘德忠;郭彦君;曾辉英;姜文浩;李槐;周纯武;;经皮肝穿刺注射无水乙醇配合肝动脉化疗栓塞术治疗原发性肝癌[A];中华医学会第一次全国介入医学学术会议论文汇编[C];2001年

6 黎乐群;李航;;原发性肝癌术后复发的再治疗选择[A];第八届全国肝癌学术会议论文汇编[C];2001年

7 李桂荣;;原发性肝癌86例分析[A];第八届全国肝癌学术会议论文汇编[C];2001年

8 吴丽娟;;老年原发性肝癌临床分析[A];中国老年学学会2006年老年学学术高峰论坛论文集[C];2006年

9 杨红梅;樊静;;“晕圈”在超声诊断原发性肝癌中的价值[A];2006年浙江省超声医学学术年会论文汇编[C];2006年

10 黄建钊;石承先;范伟;苟欣;冯新富;汤可立;张德林;范永峰;顾红光;吴刚;;区域性灌注化疗在原发性肝癌手术切除后的疗效观察[A];2007年贵州省医学会外科分会学术年会论文汇编[C];2007年

相关重要报纸文章 前10条

1 文一;中西医互补治疗原发性肝癌有优势[N];中国中医药报;2013年

2 日升;拜耳支持原发性肝癌规范化诊疗推广项目[N];中国医药报;2010年

3 程祖亨;原发性肝癌到底要不要手术[N];农村医药报(汉);2012年

4 胡继雄;隐匿杀手原发性肝癌[N];大众卫生报;2003年

5 曾运红　谭卫仙;原发性肝癌的主要危险因素[N];中国中医药报;2004年

6 金鸥邋岳金凤 记者 吴天飞;研究发现 吃树莓葡萄苹果能防原发性肝癌[N];哈尔滨日报;2008年

7 冯大夫;原发性肝癌的特点及诊治[N];人民日报海外版;2000年

8 冀京蕊;如何发现原发性肝癌[N];中国中医药报;2008年

9 忠文;治原发性肝癌验方[N];民族医药报;2001年

10 朱永康（江苏省中医院普外科主任）;原发性肝癌不一定有临床症状[N];上海中医药报;2005年

相关博士学位论文 前10条

1 苏成豪;厦门地区HBV感染、环境因素及基因多态性与原发性肝癌的关联研究[D];福建医科大学;2015年

2 穆罕默德（Mohammed Alnaggar）;原发性肝癌冷冻疗法对肝功能的影响[D];华中科技大学;2015年

3 刘志辉;原发性肝癌微量元素与化疗药物敏感性的相关性研究[D];广西医科大学;2015年

4 刘忠;IER3基因在原发性肝癌中的表达及意义[D];青岛大学;2015年

5 张丰华;原发性肝癌证型分布演变规律及柴胡皂甙D诱导肝癌细胞分化的研究[D];成都中医药大学;2009年

6 卢彦达;原发性肝癌三维适形放疗乙型肝炎病毒再激活[D];天津医科大学;2010年

7 高姗;上海市区原发性肝癌的流行病学研究[D];复旦大学;2011年

8 许飞;原发性肝癌肝动脉化疗栓塞术及联合调强放疗的临床研究[D];北京协和医学院;2012年

9 岳小强;舌质颜色的模式识别及原发性肝癌患者舌色的临床研究[D];第二军医大学;2005年

10 高春;2型糖尿病对原发性肝癌影响的临床和基础研究[D];北京协和医学院;2011年

相关硕士学位论文 前10条

1 李冲;老年原发性肝癌患者临床病理特点及治疗预后分析[D];第三军医大学;2013年

2 郑婕铃;~(99m)Tc-3PRGD_2在原发性肝癌诊断中的实验研究[D];福建医科大学;2015年

3 刘小瑜;辅助性肝动脉化疗栓塞术对原发性肝癌切除手术预后的影响[D];福建医科大学;2015年

4 曾荣耀;姜黄素对大鼠原发性肝癌缺氧后血管生成的影响[D];福建医科大学;2015年

5 刘康;原发性肝癌TAGE治疗后VEGF与HIF-1α的变化及意义[D];川北医学院;2015年

6 刘金明;POSSUM及P-POSSUM评分系统预测原发性肝癌患者行肝切除术风险的价值[D];河北医科大学;2015年

7 祝朝前;重组人p53腺病毒联合肝动脉栓塞化疗术治疗原发性肝癌前后T细胞亚群变化的临床研究[D];河北医科大学;2015年

8 刘伟;首次TACE对原发性肝癌患者肝肾功能的近期影响[D];石河子大学;2015年

9 乔秋阁;肝癌患者营养状况与临床结局相关性研究[D];河北医科大学;2015年

10 马娟;VEGF、PD-ECGF在TACE治疗原发性肝癌中晚期患者中的检测意义[D];宁夏医科大学;2015年

本文编号：2528548