美洲大蠊多肽抗肿瘤及免疫调节作用研究

发布时间：2019-09-11 20:34

【摘要】：目的肿瘤是严重危害人类健康的重大疾病,每年都有数以百万计的人死于肿瘤。肿瘤的治疗方法为手术、化疗和放疗。但这些治疗方法靶向性差,除了杀死肿瘤细胞外,正常细胞也被杀死,导致患者不能耐受治疗。因此,从天然产物中寻找高效、低毒的抗肿瘤药物是目前科研工作者的任务之一。美洲大蠊是传统的动物类中药,具有抗炎、抗肿瘤等作用,但其抗肿瘤的机制仍然不清楚。本研究通过采用美洲大蠊精制物CⅡ-3及其相关合成短肽HFDT1对L1210荷瘤小鼠的抗肿瘤作用及免疫器官、免疫细胞和免疫因子等免疫指标的影响,探讨美洲大蠊精制物CⅡ-3及其相关合成短肽HFDT1对L1210荷瘤小鼠抑瘤及免疫功能的影响。方法采用BALB/c小鼠建立L1210实体瘤模型,将小鼠随机分为空白对照组、荷瘤对照组、环磷酰胺(CTX)组、CⅡ-3高、低剂量组、HFDT1组,共6组。各组连续给药10d(空白对照组与荷瘤对照组,给予生理盐水灌胃,20m L/kg,1次/天;CⅡ-3高、低剂量组给予20m L/kg,1次/天;HFDT1组给予7.8mg/m L腹腔注射,10mL/kg,1次/天;CTX组给予45mg/kg腹腔注射,10mL/kg,1次/隔天)。常规饲养,观察小鼠体重变化。末次给药后次日,称重后处死小鼠,测定各组荷瘤小鼠瘤体重量变化、抑瘤率和各组的胸腺指数及脾脏指数变化;采用血细胞分析仪测定L1210荷瘤小鼠外周血免疫细胞数量;采用双抗体夹心ELISA法研究CⅡ-3及HFDT1对L1210荷瘤小鼠血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA水平的影响;研究CⅡ-3及HFDT1对L1210荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;采用流式细胞术分析CⅡ-3及HFDT1对L1210荷瘤小鼠固有免疫细胞(巨噬细胞、NK、DC),T细胞及其亚群,B细胞及其亚群的影响;采用CFSE标记法研究CⅡ-3及HFDT1对L1210荷瘤小鼠脾T、B淋巴细胞增殖的影响;采用流式细胞术测定肿瘤组织和脾脏Th1/Th2反应;采用ELISA法研究CⅡ-3及HFDT1对L1210荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α,肿瘤相关淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-4,脾脏淋巴细胞分泌IL-2,IL-4,IL-10,IL-17,IFN-γ的影响。结果1、美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1在体内对L1210肿瘤细胞有较好的抑制作用,CTX、CⅡ-3高剂量、CⅡ-3低剂量、短肽HFDT1的抑瘤率分别为59.57%、55.32%、65.32%、61.70%。与CTX组比,CⅡ-3及HFDT1小鼠体重增加(P0.05)。2、与模型组和CTX组比较,美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1均提高小鼠胸腺指数和脾脏指数(P0.05)。3、与CTX组比,美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1可增加荷瘤小鼠外周血中白细胞、淋巴细胞、单核细胞和粒细胞的数量。4、与CTX组比,美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1可增加血清IgA、IgG、IgM水平(P0.05)。5、与模型组和CTX组比,美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1能够使脾脏巨噬细胞数量增多;与模型组比,CⅡ-3及HFDT1使腹腔巨噬细胞吞噬指数及吞噬百分数升高,HFDT1组升高明显(P0.05);CⅡ-3及HFDT1能腹腔巨噬细胞分泌TNF-α增加(P0.05)。美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1均能使脾脏NK、DC细胞数量增加。与模型组与CTX组比,美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1下调肿瘤组织Th17细胞,上调脾脏Th17细胞。6、CⅡ-3及HFDT1能够维持脾脏淋巴细胞数量,上调T细胞,下调B细胞。与模型组比,改变CD4/CD8 T细胞比例,下调CD4+T细胞,上调CD8+T细胞,其中CⅡ-3低剂量组CD4+T细胞明显减少,CD8+T细胞明显增多。与CTX组比,CⅡ-3及HFDT1能够使起到负调控的Treg细胞明显减少,初始T细胞(CD45RA+细胞)减少,其中CⅡ-3低剂量组Treg下降明显,HFTD1组CD45RA+下降明显。7、肿瘤组织与脾脏中淋巴细胞Th1/Th2反应是一致的,与模型组和CTX组比,美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1均能够调节Th1/Th2反应,上调Th1反应,下调Th2反应。从细胞因子变化水平来看,与模型组比,CⅡ-3及HFDT1均能使肿瘤浸润淋巴细胞分泌IFN-γ增加、IL-4减少,其中HFDT1组IFN-γ明显升高,CⅡ-3低剂量组IL-4较CTX组明显减少;与CTX组比,CⅡ-3及HFDT1均能使脾脏淋巴细胞IFN-γ、IL-2分泌增加,IL-4、IL-10分泌减少。8、CⅡ-3低剂量及HFDT1能增加成熟B细胞(IgM-IgDhi)和活化B细胞(CD45RA-)的数量。与模型组和CTX组比,CⅡ-3及HFDT1能够促进B淋巴细胞增殖。结论1、美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1能抑制L1210荷瘤小鼠体内肿瘤的生长,CⅡ-3及其相关合成肽HFDT1对荷瘤小鼠体重无影响。2、美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1可以增强荷瘤小鼠免疫器官功能、增强外周血免疫细胞数量与免疫球蛋白水平。3、美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1可以上调抗肿瘤NK细胞、巨噬细胞、DC、Th1、CTL细胞,同时抑制负调控Th2、Treg、Th17细胞。4、美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1可以调节Th1/Th2反应,增强抗肿瘤细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2的分泌及促进淋巴细胞增殖。总之,美洲大蠊精制物CⅡ-3及HFDT1的抗肿瘤作用可能是通过调控机体的免疫功能来发挥作用的。
【图文】：

瘤重,抑瘤率,荷瘤小鼠,灌胃

组分别给予 400mg/kg、200mg/kg 灌胃，20mL/kg，1 次/d；.8mg/kg腹腔注射，10mL/kg，1 次/d；CTX剂量给予 45mg/kgg，1 次/隔天；模型组及正常组给予生理盐水灌胃，20mL/k药 10d。荷瘤小鼠肿瘤抑制率的测定末次给药次日，称各组小鼠体重，小鼠眼底静脉丛取血后颈 75% 酒精中 3-5min。用无菌纸巾擦干小鼠，放入超净台中。整剥离瘤块组织，，精确称重并按公式计算抑瘤率。公式如下抑瘤率=（1－实验组瘤重/模型组瘤重）×100%果CⅡ-3 及 HFDT1 对荷瘤小鼠体重的影响

美洲大蠊,免疫调节,抗肿瘤作用,硕士学位论文

瘤块肉眼观A排从左到右依次为模型组、CTX组；B排从左到右依次为CⅡ-3高剂量组、CⅡ-3低剂量组、HFDT1组；上图所示为各组中的一个典型个体
【学位授予单位】：大理大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R73-36

【参考文献】