上游元件结合蛋白-1在B细胞非霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义

发布时间：2019-09-12 12:58

【摘要】：目的1.研究上游元件结合蛋白-1(far upstream element binding protein 1,FBP1)在我国B细胞非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin’s lymphomas,NHL)中的表达情况,在整体水平明确FBP1异常表达与B细胞NHL发生发展的关系。2.研究FBP1表达在B细胞来源的NHL细胞株Daudi和OCI-LY8细胞增殖、细胞周期调控以及细胞粘附介导的耐药(cell adhesion mediated drug resistance,CAM-DR)过程中作用,在分子水平探讨FBP1表达参与调控NHL细胞生物学行为的分子机制。方法1.在组织学水平,采用免疫组织化学技术检测80例不同病理分型的B细胞NHL组织和19例反应性增生(recative lymphadenopathy,RL)淋巴组织石蜡切片中FBP1的表达情况,并结合B细胞NHL临床病理资料分析FBP1表达水平与B细胞NHL患者的年龄、性别、淋巴结结外受累情况和乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)等因素之间的关系,采用单因素和Cox危险比例模型多因素分析FBP1表达与B细胞NHL患者预后的关系。2.在细胞水平,采用Western blot方法检测B细胞NHL细胞系中FBP1的表达情况;并利用FBP1小干扰片段(si RNAs)转染B细胞来源的NHL细胞株Daudi和OCI-LY8细胞,流式细胞仪、Western blot、细胞活力试验等技术检测FBP1表达对NHL细胞周期、细胞活力的影响;构建NHL细胞粘附模型,并使用化疗药物多柔比星(Doxorubicin,Dox)刺激细胞,钙黄绿素实验、细胞活力实验等检测并探讨FBP1表达对NHL细胞粘附介导的耐药过程的影响及分子机制。结果1.免疫组化结果显示,FBP1表达水平在不同病理类型的B细胞NHL组织中存在明显差异,侵袭性NHL组织中FBP1的表达水平明显高于惰性NHL组织。统计学分析显示,FBP1的表达强度与患者年龄(P0.001)淋巴结结外受累情况(P=0.025)、细胞增殖指数Ki-67的表达水平(P0.001)有显著差异。单因素分析结果显示FBP1的表达水平与B细胞NHL患者的不良预后有关,FBP1表达越高,患者五年生存率越低(P0.001)。Cox危险比例模型分析显示FBP1可做为NHL预后的独立指标(P0.001)。2.FBP1在NHL细胞株Daudi和OCI-LY8中有显著表达,在上述两种细胞中转染FBP1小干扰质粒,肿瘤增殖标记蛋白PCNA表达下降,细胞存活能力下降。流式细胞仪结果显示,FBP1低表达可以诱导NHL细胞周期阻滞在G1期,细胞周期调节蛋白CDK2、CyclinA、CyclinD1表达均降低。钙黄绿素实验结果显示,在粘附培养的NHL细胞中FBP1的蛋白表达水平高于悬浮培养的NHL细胞;干扰FBP1的表达后,NHL细胞的粘附能力下降,同时NHL细胞对化疗药物Dox的敏感性增加。结论1.FBP1在B细胞NHL组织中高表达,其表达水平与患者的不良预后正相关,提示FBP1可能与B细胞NHL的发生发展密切相关,可作为B细胞NHL预后的指标之一。2.FBP1的表达水平影响NHL细胞周期进程及细胞活力,并且参与调控NHL细胞粘附介导的耐药过程。该项目的研究将为临床治疗NHL寻找新的药物靶点提供理论参考依据。
【图文】：

免疫组织化学方法,淋巴组织,表达差异,非霍奇金淋巴瘤

18图 1 FBP1 在人 B 细胞非霍奇金淋巴瘤组织的表达免疫组织化学方法检测 FBP1 的核表达在 HCC 及不同类型淋巴组织中的表在惰性淋巴瘤组织中呈弱阳性或阳性（E-H）而在侵袭性淋巴瘤组织中呈强J）。放大倍数（A.C.E.G.I）200×，（B.D.F.H.J）400×。

B细胞,淋巴细胞,细胞,点收

图 2 FBP1 在 B 细胞 NHL 中的表达与干扰Western blot 检测 FBP1 在 HCC、正常肝细胞及淋巴细胞株 OCI-LY8 中A）。在 OCI-LY8 细胞干扰 FBP1 表达（B）。灰度统计 FBP1 siRNA 干扰（C）。*与对照组相比， P < 0.05。.2 干扰 FBP1 对 B 细胞 NHL 细胞增殖的影响在OCI-LY8细胞株中siRNA干扰FBP1表达后，肿瘤形成促进因表达和增殖标记蛋白PCNA的表达都呈现下调趋势（图3A）。同P1的表达后，选取不同时间点收集细胞、利用CCK-8实验纵向观殖情况。结果显示，发现干扰FBP1表达后，与对照组相比，细胞明显抑制（图3B）。结果提示FBP1的高表达可能与B细胞NHL细正相关。
【学位授予单位】：南通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.1

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